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公开(公告)号：CN112391368A
公开(公告)日：2021-02-23
申请号：CN202011041012.0
申请日：2020-09-28
Applicant: 中南民族大学
IPC: C12N9/24 , C12N15/56 , C12N15/81 , C12N1/19 , A23K20/147 , A23L29/00 , D21C5/00 , C11D3/386 , C11D7/42 , C12R1/84 , D06M16/00
Abstract: 本发明公开一种甘露聚糖酶突变体及其制备方法和应用。所述甘露聚糖酶突变体为将甘露聚糖酶的氨基酸序列进行突变后得到的蛋白质，所述突变为在甘露聚糖酶的C端添加6个精氨酸、6个赖氨酸或6个天冬氨酸。本发明构建获得高效分泌表达所述突变体的毕赤酵母工程菌，与表达野生型甘露聚糖酶的重组菌相比，表达甘露聚糖酶突变体重组菌的胞内酶活均有下降，而上清液的酶活均有提高，其中X33/ManA‑R6上清液的酶活力提高幅度最大，达549U/mL，提高了1.52倍。本发明的突变体可减少该甘露聚糖酶分泌表达时在胞内的滞留，提高分泌效率和分泌量。
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公开(公告)号：CN113549644A
公开(公告)日：2021-10-26
申请号：CN202110529058.5
申请日：2021-05-14
Applicant: 中南民族大学
Abstract: 本发明公开了一种共展示三种NSP酶的重组酵母及其制备方法和应用，所述重组酵母为以毕赤酵母细胞壁蛋白作为锚定蛋白，将木聚糖酶DSB、葡聚糖酶EGⅡ和果胶酶PG5三种NSP酶共同展示表达在毕赤酵母细胞表面，构建出三种NSP酶细胞表面共展示重组酵母工程菌，制备了三种NSP酶细胞表面共展示型全细胞催化剂，摇瓶发酵时该全细胞催化剂木聚糖酶酶活最高达13236U/g，葡聚糖酶酶活最高达2056U/g，果胶酶酶活最高达3227U/g。三种NSP酶共展示重组酵母工程菌可同时高效展示表达3种NSP酶，实现“一菌多酶”，与游离酶相比具有稳定性好、制备方法简单、易于回收和再生利用、降低生产成本等优势，且三种NSP酶共展示型全细胞催化剂降解处理饲粮原料小麦麸中NSP时，三种酶存在明显的协同促进作用。
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公开(公告)号：CN113549644B
公开(公告)日：2024-02-02
申请号：CN202110529058.5
申请日：2021-05-14
Applicant: 中南民族大学
Abstract: 协同促进作用。本发明公开了一种共展示三种NSP酶的重组酵母及其制备方法和应用，所述重组酵母为以毕赤酵母细胞壁蛋白作为锚定蛋白，将木聚糖酶DSB、葡聚糖酶EGⅡ和果胶酶PG5三种NSP酶共同展示表达在毕赤酵母细胞表面，构建出三种NSP酶细胞表面共展示重组酵母工程菌，制备了三种NSP酶细胞表面共展示型全细胞催化剂，摇瓶发酵时该全细胞催化剂木聚糖酶酶活最高达13236U/g，葡聚糖酶酶活最高达2056U/g，果胶酶酶活最高达3227U/g。三种NSP酶共展示重组酵母工程菌可同时高效展示表达3种NSP酶，实现“一菌多酶”，与游离酶相比具有稳定性好、制备方法(56)对比文件杨青;汪斌;王亚伟;张华山;熊海容;张莉.介导两种半纤维素酶分泌表达的信号肽比较.中国生物工程杂志.2017,(第08期),第21-28页.Henrik Dalbøge.Expression cloning offungal enzyme genes;a novel approach forefficient isolation of enzyme genes ofindustrial relevance.FEMS MicrobiologyReviews.1997,第21卷第29–42页.NCBI.GU166389.1.Genbank.2016,第1页.NCBI.JF340120.1.Genbank.2014,第1-2页.NCBI.XM_001264034.1.Genbank.2020,第1-2页.Grethe Venås 等Jakobsen.Improving thenutritional value of rapeseed cake andwheat dried distillers grains withsolubles by addition of enzymes duringliquid fermentation.Animal Feed Scienceand Technology.2015,地1-16页.
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