公开(公告)号：CN110714030A

公开(公告)日：2020-01-21

申请号：CN201911220797.5

申请日：2019-12-03

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 李健强 ,  张治萍 ,  李迎宾 ,  罗来鑫

IPC: C12N15/90 ,  C12N1/15 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开了属于生物技术领域的一种长喙壳菌外源基因转化的方法。本发明的方法通过将长喙壳菌的原生质体与适量的含有筛选标记的外源DNA片段和含有向导RNA(SgRNA)的质粒载体进行混合，然后利用PEG介导的原生质体的转化及转化子筛选，从而将含有筛选标记的外源DNA片段转入长喙壳菌基因组中，实现了PEG介导的长喙壳菌原生质体转化，建立了一套完整的遗传转化、筛选方法，易获得表达潮霉素抗性蛋白且稳定遗传的转化菌株，转化效率较高。

公开(公告)号：CN109161485A

公开(公告)日：2019-01-08

申请号：CN201811121807.5

申请日：2018-09-26

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 李健强 ,  张治萍 ,  李倩 ,  韩惠兰 ,  李迎宾 ,  罗来鑫 ,  蒋娜

IPC: C12N1/14 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开了属于生物工程技术领域的一种长喙壳菌原生质体的制备方法。所述制备方法，包括步骤如下：1)菌株活化培养：将保存的长喙壳菌接种至MYEA平板培养基中进行活化培养；2)菌丝体制备及收集：在菌落边缘取菌丝块，接入液体培养基中进行摇床培养，用滤膜过滤收集菌丝；3)酶解及原生质体收集：将收集的菌丝体用酶解液酶解，酶解后用渗透压稳定剂洗涤，离心去除酶解液，再用STC溶液洗涤，离心收集，得到原生质体。本发明的制备方法，工艺简单，对设备要求低，易于操作，利用本发明方法进行生产原生质体产量可达5.0-7.0×107个/ml。

公开(公告)号：CN109287189A

公开(公告)日：2019-02-01

申请号：CN201811056314.8

申请日：2018-09-11

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 李健强 ,  李迎宾 ,  刘屹湘 ,  张治萍 ,  罗来鑫 ,  蒋娜 ,  朱书生 ,  杨敏 ,  姜治国

IPC: A01C1/00

Abstract: 本发明公开了属于中药材栽培技术领域的一种三七种子跨年度保存及打破休眠的方法，包括如下步骤：采集成熟种子后不进行去皮处理；将种子脱水处理后密封包装，进行跨年度低温保存；将保存的种子在蛭石-草炭基质中进行播种。本发明的方法能显著延长三七种子的保存时间，保存415d后仍具有较高的出苗及存活率。其中，出苗率可达76％以上；出苗后40d，三七苗存活率保持在68.5％以上。本发明的方法所需设备简单，操作简单易行，整个处理过程方便快捷且处理成本低，便于在生产实践中推广应用。

公开(公告)号：CN106635839A

公开(公告)日：2017-05-10

申请号：CN201611221316.9

申请日：2016-12-26

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 李健强 ,  张治萍 ,  李倩 ,  罗来鑫 ,  蒋娜 ,  王宁 ,  高淑梅 ,  曹永松 ,  姜治国

IPC: C12N1/14 ,  C12N1/02 ,  C12R1/645

CPC classification number: C12N1/14 ,  C12N1/02

Abstract: 本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种从土壤中分离长喙壳菌的方法。本发明采用胡萝卜进行长喙壳菌的富集，并通过挑取单个子囊孢子团划线的方法进行长喙壳菌的分离纯化，有效的从土壤中分离到长喙壳菌，本发明因部分操作无需严格的无菌条件，适合野外考察、田间调查过程中的菌株收集，大大提高了工作效率；挑取单个子囊孢子团划线进行靶标菌的分离纯化，有效的提高了分离纯化效率，节省时间；另外本发明成本低、使用范围广、安全环保。

公开(公告)号：CN109287189B

公开(公告)日：2021-03-09

申请号：CN201811056314.8

申请日：2018-09-11

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 李健强 ,  李迎宾 ,  刘屹湘 ,  张治萍 ,  罗来鑫 ,  蒋娜 ,  朱书生 ,  杨敏 ,  姜治国

IPC: A01C1/00

Abstract: 本发明公开了属于中药材栽培技术领域的一种三七种子跨年度保存及打破休眠的方法，包括如下步骤：采集成熟种子后不进行去皮处理；将种子脱水处理后密封包装，进行跨年度低温保存；将保存的种子在蛭石‑草炭基质中进行播种。本发明的方法能显著延长三七种子的保存时间，保存415d后仍具有较高的出苗及存活率。其中，出苗率可达76％以上；出苗后40d，三七苗存活率保持在68.5％以上。本发明的方法所需设备简单，操作简单易行，整个处理过程方便快捷且处理成本低，便于在生产实践中推广应用。

公开(公告)号：CN106635839B

公开(公告)日：2020-06-23

申请号：CN201611221316.9

申请日：2016-12-26

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 李健强 ,  张治萍 ,  李倩 ,  罗来鑫 ,  蒋娜 ,  王宁 ,  高淑梅 ,  曹永松 ,  姜治国

IPC: C12N1/14 ,  C12N1/02 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种从土壤中分离长喙壳菌的方法。本发明采用胡萝卜进行长喙壳菌的富集，并通过挑取单个子囊孢子团划线的方法进行长喙壳菌的分离纯化，有效的从土壤中分离到长喙壳菌，本发明因部分操作无需严格的无菌条件，适合野外考察、田间调查过程中的菌株收集，大大提高了工作效率；挑取单个子囊孢子团划线进行靶标菌的分离纯化，有效的提高了分离纯化效率，节省时间；另外本发明成本低、使用范围广、安全环保。