公开(公告)号：CN118547093B

公开(公告)日：2024-11-05

申请号：CN202411000487.3

申请日：2024-07-25

Applicant: 中国农业大学三亚研究院 ,  中国农业大学 ,  中国热带农业科学院椰子研究所

Inventor： 朱小琼 ,  原昕雨 ,  唐庆华 ,  国立耘 ,  姜文君

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas12a方法检测槟榔黄化植原体的引物组、试剂盒及其使用方法，所述引物包括SEQ ID NO.1所示的上游引物序列，SEQ ID NO.2所示下游引物序列。所述试剂盒包括用于扩增待测DNA的引物、核酸扩增试剂、crRNA、ssDNA荧光报告探针、Cas12a酶。试剂盒的检测方法如下：S1、提取待检测样本的DNA；S2、对步骤S1中获得的DNA进行扩增；S3、将crRNA、ssDNA荧光报告探针和Cas12a酶与步骤S2中得到的核酸扩增产物混合进行反应，对反应产物进行检测；S4、通过荧光检测确定检测结果。本发明设计的引物组特异性强，检测的灵敏度高，是普通PCR扩增的100倍，检测限可达2.29×102拷贝/μL，响应速度快，结果判定简单，操作简便。

公开(公告)号：CN118547093A

公开(公告)日：2024-08-27

申请号：CN202411000487.3

申请日：2024-07-25

Applicant: 中国农业大学三亚研究院 ,  中国农业大学 ,  中国热带农业科学院椰子研究所

Inventor： 朱小琼 ,  原昕雨 ,  唐庆华 ,  国立耘 ,  姜文君

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas12a方法检测槟榔黄化植原体的引物组、试剂盒及其使用方法，所述引物包括SEQ ID NO.1所示的上游引物序列，SEQ ID NO.2所示下游引物序列。所述试剂盒包括用于扩增待测DNA的引物、核酸扩增试剂、crRNA、ssDNA荧光报告探针、Cas12a酶。试剂盒的检测方法如下：S1、提取待检测样本的DNA；S2、对步骤S1中获得的DNA进行扩增；S3、将crRNA、ssDNA荧光报告探针和Cas12a酶与步骤S2中得到的核酸扩增产物混合进行反应，对反应产物进行检测；S4、通过荧光检测确定检测结果。本发明设计的引物组特异性强，检测的灵敏度高，是普通PCR扩增的100倍，检测限可达2.29×102拷贝/μL，响应速度快，结果判定简单，操作简便。