公开(公告)号：CN111100841A

公开(公告)日：2020-05-05

申请号：CN201811248715.3

申请日：2018-10-25

Applicant: 中国医学科学院药物研究所

Inventor： 杜冠华 ,  强桂芬 ,  何萍 ,  刘俊成 ,  杨秀颖 ,  张莉 ,  侯碧玉 ,  徐春阳

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/113 ,  C12N15/90 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明公开了一种构建抗肥胖药物靶点UCP1的基因工程细胞株的方法，同时公开了抗肥胖药物高通量筛选模型的建立及应用。主要涉及利用CRISPR/Cas9系统，设计两条独特的sgRNA，在细胞的UCP1基因N端ATG之后敲入luciferase-T2A-tdTomato-WPRE-pA，特别是将luciferase和tdTomato敲入永生化棕色脂肪细胞UCP1的基因位点，形成首株在UCP1启动子区域插入luciferase和tdTomato的稳转棕色脂肪细胞株，并将其应用于抗肥胖药物的高通量筛选、抗肥胖药物的评价、机体抗肥胖活性物质的评价以及UCP1检测试剂盒的开发。UCP1是特异性表达于棕色脂肪组织的解偶联蛋白，抵抗肥胖的新靶点，该稳转基因工程细胞株的构建对于应用报告基因和高内涵方法，灵敏、准确、高效地对化合物库进行高通量筛选，获得促进产热、降低体重的抗肥胖药物意义重大。

公开(公告)号：CN111100841B

公开(公告)日：2022-07-19

申请号：CN201811248715.3

申请日：2018-10-25

Applicant: 中国医学科学院药物研究所

Inventor： 杜冠华 ,  强桂芬 ,  何萍 ,  刘俊成 ,  杨秀颖 ,  张莉 ,  侯碧玉 ,  徐春阳

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/113 ,  C12N15/90 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明公开了一种构建抗肥胖药物靶点UCP1的基因工程细胞株的方法，同时公开了抗肥胖药物高通量筛选模型的建立及应用。主要涉及利用CRISPR/Cas9系统，设计两条独特的sgRNA，在细胞的UCP1基因N端ATG之后敲入luciferase‑T2A‑tdTomato‑WPRE‑pA，特别是将luciferase和tdTomato敲入永生化棕色脂肪细胞UCP1的基因位点，形成首株在UCP1启动子区域插入luciferase和tdTomato的稳转棕色脂肪细胞株，并将其应用于抗肥胖药物的高通量筛选、抗肥胖药物的评价、机体抗肥胖活性物质的评价以及UCP1检测试剂盒的开发。UCP1是特异性表达于棕色脂肪组织的解偶联蛋白，抵抗肥胖的新靶点，该稳转基因工程细胞株的构建对于应用报告基因和高内涵方法，灵敏、准确、高效地对化合物库进行高通量筛选，获得促进产热、降低体重的抗肥胖药物意义重大。