公开(公告)号：CN103146683B

公开(公告)日：2015-03-11

申请号：CN201310053486.0

申请日：2013-02-19

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 刘刚 ,  胡德夫 ,  刘宝庆 ,  李林海 ,  徐超群

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种从哺乳动物和鸟类粪便中提取并纯化总DNA的方法。该方法包括如下步骤：1）前处理：若粪便成形，体积大于等于1×1×1cm3，且表面有粘液层，则以粘液层为待测样品；其余以粪便为待测样品；2）提取：将待测样品置于pH8.0的缓冲液中，混匀后于56-60℃保温8-12min；500g离心5-10min，取上清；除蛋白；进行DNA抽提和DNA沉淀，得到待纯化总DNA；3）纯化：将待纯化总DNA进行琼脂糖凝胶电泳，切下含待纯化总DNA的胶块，加入溶胶液，于65-75℃溶胶，溶胶后样品加入硅胶膜DNA吸附柱内，进行DNA纯化，得到纯化后的总DNA样品。本发明对不同类型粪便进行不同预处理；通过梯度离心使粪渣和肠道脱落细胞有效分离；增加温浴，使脱落细胞更易从粪渣中析出，最大限度提高细胞含量。

公开(公告)号：CN103146683A

公开(公告)日：2013-06-12

申请号：CN201310053486.0

申请日：2013-02-19

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 刘刚 ,  胡德夫 ,  刘宝庆 ,  李林海 ,  徐超群

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种从哺乳动物和鸟类粪便中提取并纯化总DNA的方法。该方法包括如下步骤：1）前处理：若粪便成形，体积大于等于1×1×1cm3，且表面有粘液层，则以粘液层为待测样品；其余以粪便为待测样品；2）提取：将待测样品置于pH8.0的缓冲液中，混匀后于56-60℃保温8-12min；500g离心5-10min，取上清；除蛋白；进行DNA抽提和DNA沉淀，得到待纯化总DNA；3）纯化：将待纯化总DNA进行琼脂糖凝胶电泳，切下含待纯化总DNA的胶块，加入溶胶液，于65-75℃溶胶，溶胶后样品加入硅胶膜DNA吸附柱内，进行DNA纯化，得到纯化后的总DNA样品。本发明对不同类型粪便进行不同预处理；通过梯度离心使粪渣和肠道脱落细胞有效分离；增加温浴，使脱落细胞更易从粪渣中析出，最大限度提高细胞含量。