公开(公告)号：CN101096668A

公开(公告)日：2008-01-02

申请号：CN200710052388.X

申请日：2007-06-06

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 陈守文 ,  郭志伟 ,  李滔

IPC: C12N15/09 ,  C12N15/31 ,  C12N15/60 ,  C12N1/21

Abstract: 本发明属于微生物基因工程技术领域，具体涉及一种乳链菌肽基因工程菌的构建方法，以乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)il1403总DNA为模板，扩增得到编码谷氨酸脱羧酶和谷氨酸转运体蛋白的基因gadCB。将gadCB基因克隆到表达载体pMG36e中，构建得到重组表达质粒pMG36egad，然后再用重组表达质粒pMG36egad电转化乳链菌肽产生菌Lactococcus lactis ATCC 11454，获得本发明的乳链菌肽基因工程菌，将该基因工程菌命名为MELgad。应用SDS-PAGE分析和酶活测定，显示本发明克隆的gadCB基因在基因工程菌中得到组成型和活性表达。测定结果表明本发明克隆的基因工程菌的生物量和乳链菌肽产量比宿主菌分别提高了39％和24％。本发明为乳链菌肽高产基因工程菌的构建开辟了一条新的途径。

公开(公告)号：CN101096668B

公开(公告)日：2010-08-18

申请号：CN200710052388.X

申请日：2007-06-06

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 陈守文 ,  郭志伟 ,  李滔

IPC: C12N15/09 ,  C12N15/31 ,  C12N15/60 ,  C12N1/21

Abstract: 本发明属于微生物基因工程技术领域，具体涉及一种乳链菌肽基因工程菌的构建方法，以乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)il1403总DNA为模板，扩增得到编码谷氨酸脱羧酶和谷氨酸转运体蛋白的基因gadCB。将gadCB基因克隆到表达载体pMG36e中，构建得到重组表达质粒pMG36egad，然后再用重组表达质粒pMG36egad电转化乳链菌肽产生菌Lactococcus lactisATCC 11454，获得本发明的乳链菌肽基因工程菌，将该基因工程菌命名为MELgad。应用SDS-PAGE分析和酶活测定，显示本发明克隆的gadCB基因在基因工程菌中得到组成型和活性表达。测定结果表明本发明克隆的基因工程菌的生物量和乳链菌肽产量比宿主菌分别提高了39％和24％。本发明为乳链菌肽高产基因工程菌的构建开辟了一条新的途径。