公开(公告)号：CN110452922B

公开(公告)日：2021-03-26

申请号：CN201910728089.6

申请日：2019-08-08

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 彭楠 ,  刘玲 ,  杨丹露 ,  张志雨 ,  梁运祥

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/90 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种乳酸片球菌基因编辑质粒，其构建方法包括：将含有两个DNA重复序列和两个三型酶切位点Bbs1的mini‑CRISPR序列克隆至穿梭质粒pMG36E并转化至大肠杆菌中，获取转化子，再经活化、抽提得到乳酸片球菌基因编辑质粒pMG36E‑C。还公开了利用内源性CRISPR系统对乳酸片球菌进行基因敲除、插入及点突变的方法，不需要克隆外源CRISPR核酸酶基因，通过基因编辑质粒可高效快速的对乳酸片球菌进行基因组编辑，编辑效率可达90％，利于应用及推广；完成编辑的菌株只需2‑3次传代即可完成带抗性的敲除质粒消除，利于多个基因连续编辑，改变营养代谢途径或者插入新代谢途径，以达到定向改造。

公开(公告)号：CN110452922A

公开(公告)日：2019-11-15

申请号：CN201910728089.6

申请日：2019-08-08

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 彭楠 ,  刘玲 ,  杨丹露 ,  张志雨 ,  梁运祥

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/90 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种乳酸片球菌基因编辑质粒，其构建方法包括：将含有两个DNA重复序列和两个三型酶切位点Bbs1的mini-CRISPR序列克隆至穿梭质粒pMG36E并转化至大肠杆菌中，获取转化子，再经活化、抽提得到乳酸片球菌基因编辑质粒pMG36E-C。还公开了利用内源性CRISPR系统对乳酸片球菌进行基因敲除、插入及点突变的方法，不需要克隆外源CRISPR核酸酶基因，通过基因编辑质粒可高效快速的对乳酸片球菌进行基因组编辑，编辑效率可达90％，利于应用及推广；完成编辑的菌株只需2-3次传代即可完成带抗性的敲除质粒消除，利于多个基因连续编辑，改变营养代谢途径或者插入新代谢途径，以达到定向改造。