公开(公告)号：CN105463113A

公开(公告)日：2016-04-06

申请号：CN201610023504.4

申请日：2016-01-14

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王新荣 ,  张劲蔼 ,  陈芳妮 ,  祝乐天 ,  孙思 ,  吴路平

IPC: C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/6841 ,  C12Q2565/518

Abstract: 本发明公开了一种雌根结线虫食道腺基因原位杂交技术及其应用，属于雌根结线虫基因表达检测技术领域。本发明针对雌根结线虫虫体易破裂的特点，在原位杂交的过程中采用针灸针在雌根结线虫成虫的前体部轻轻地扎1-2个小孔，提供了避免虫体破裂的方法；本发明还提供了雌根结线虫的固定技术；本发明改用96孔板实验可以减少虫体挪动，避免了离心管中因大量虫子聚集挤压造成的变形，而且雌虫体积较大，较重，不需要离心即能沉到底部，省去离心的步骤，能更好的维持虫体不变形。通过技术创新，在南方根结线虫雌成虫食道腺中实现了基因的原位杂交。

公开(公告)号：CN105675375A

公开(公告)日：2016-06-15

申请号：CN201610025221.3

申请日：2016-01-13

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王新荣 ,  张玉焕 ,  刘琴 ,  余海滨 ,  祝乐天 ,  谢华东 ,  贾宁 ,  孙思 ,  陈芳妮 ,  茅裕婷

IPC: G01N1/34

CPC classification number: G01N1/34

Abstract: 本发明属于植物样品内失活线虫的分离技术领域，公开了一种马尾松病死木中失活线虫的分离液及其分离方法和试剂盒。该分离液由pH为4.40的盐酸溶液、纤维素酶和果胶酶组成，纤维素酶和果胶酶的浓度分别为0.005和0.001mg/μl。马尾松病死木中失活线虫的分离方法按照以下步骤：将马尾松病死木材料纵切成长0.8～1.0cm，厚0.1～1mm的切片置于离心管；移取2000μl分离液于装有切片的离心管，用镊子使切片全部浸入溶液；把离心管固定在恒温振荡器中，采用50℃和250R振荡6h。本发明的分离技术，扩大了可用于检测线虫的样本来源，提高了分离效率。本发明的分离技术简单高效，可制备成试剂盒进行大规模推广。

公开(公告)号：CN105675375B

公开(公告)日：2018-09-07

申请号：CN201610025221.3

申请日：2016-01-13

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王新荣 ,  张玉焕 ,  刘琴 ,  余海滨 ,  祝乐天 ,  谢华东 ,  贾宁 ,  孙思 ,  陈芳妮 ,  茅裕婷

IPC: G01N1/34

Abstract: 本发明属于植物样品内失活线虫的分离技术领域，公开了一种马尾松病死木中失活线虫的分离液及其分离方法和试剂盒。该分离液由pH为4.40的盐酸溶液、纤维素酶和果胶酶组成，纤维素酶和果胶酶的浓度分别为0.005和0.001mg/μl。马尾松病死木中失活线虫的分离方法按照以下步骤：将马尾松病死木材料纵切成长0.8～1.0cm，厚0.1～1mm的切片置于离心管；移取2000μl分离液于装有切片的离心管，用镊子使切片全部浸入溶液；把离心管固定在恒温振荡器中，采用50℃和250R振荡6h。本发明的分离技术，扩大了可用于检测线虫的样本来源，提高了分离效率。本发明的分离技术简单高效，可制备成试剂盒进行大规模推广。

公开(公告)号：CN105463113B

公开(公告)日：2018-09-07

申请号：CN201610023504.4

申请日：2016-01-14

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王新荣 ,  张劲蔼 ,  陈芳妮 ,  祝乐天 ,  孙思 ,  吴路平

IPC: C12Q1/6841

Abstract: 本发明公开了一种雌根结线虫食道腺基因原位杂交技术及其应用，属于雌根结线虫基因表达检测技术领域。本发明针对雌根结线虫虫体易破裂的特点，在原位杂交的过程中采用针灸针在雌根结线虫成虫的前体部轻轻地扎1‑2个小孔，提供了避免虫体破裂的方法；本发明还提供了雌根结线虫的固定技术；本发明改用96孔板实验可以减少虫体挪动，避免了离心管中因大量虫子聚集挤压造成的变形，而且雌虫体积较大，较重，不需要离心即能沉到底部，省去离心的步骤，能更好的维持虫体不变形。通过技术创新，在南方根结线虫雌成虫食道腺中实现了基因的原位杂交。

公开(公告)号：CN108007755A

公开(公告)日：2018-05-08

申请号：CN201710970539.3

申请日：2017-10-18

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王新荣 ,  陈芳妮 ,  连晓聪 ,  贾宁 ,  祝乐天 ,  李远 ,  纪春艳

IPC: G01N1/30 ,  G01N1/36 ,  G01N21/84

Abstract: 本发明公开了一种有效观察番茄根结巨型细胞石蜡切片方法，本方法对影响番茄根结巨型细胞石蜡切片效果的三个关键因素进行了研究，建立了包括新的取材，包埋方式以及挑片技术的番茄根结巨型细胞石蜡切片技术。本发明的技术，明显提高了番茄根结石蜡切片的工作效率，提高了挑片质量，保证了番茄根结巨型细胞石蜡切片的效果。该方法实操性强，技术参数明确，可用于开发相关的石蜡切片包埋模具及配套使用的石蜡切片专用技术，进行广泛推广应用。

公开(公告)号：CN107702966A

公开(公告)日：2018-02-16

申请号：CN201710840101.3

申请日：2017-09-18

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王新荣 ,  连晓聪 ,  陈芳妮 ,  贾宁 ,  祝乐天 ,  李远 ,  孙思 ,  吴路平

IPC: G01N1/30

Abstract: 本发明公开了一种制作空心菜根结巨型细胞石蜡切片的方法，该方法在常规石蜡切片技术上，对染色、横切切片角度和脱蜡等步骤进行了改进。采用爱利氏苏木精染液进行植物组织的染色，将传统的脱蜡后染色改为脱蜡前整体染色。切片角度采用横切，切片厚度为5-10μm。本发明还改进了脱蜡方式，采用TO型生物制片透明剂代替二甲苯进行脱蜡。本发明空心菜根结巨型细胞石蜡切片的制作方法，明显提高了空心菜根结石蜡切片的染色效果，提高工作效率，保证了空心菜巨型细胞石蜡切片的效果。