公开(公告)号：CN106749604A

公开(公告)日：2017-05-31

申请号：CN201710065717.8

申请日：2017-02-06

Applicant: 南京中医药大学

Inventor： 闵文 ,  黄桂成 ,  方彭华 ,  袁翰 ,  黄正泉 ,  朱燕 ,  韩龙 ,  王磊 ,  周龙云

IPC: C07K14/47 ,  C07K1/14

CPC classification number: C07K14/47

Abstract: 本发明公开了一种经济实用型骨组织蛋白提取与分离方法，属于分子生物学技术领域，具体步骤如下：将称重后的离心管置于冰上预冷；量取磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂及苯甲基磺酰氟加到裂解缓冲液后，置于冰上并搅拌均匀；称取股骨干0.3～0.5g；将股骨干放在盛有液氮的研钵内，并将其研磨成粉末状；将股骨干转移至备用的离心管中并称重，即得股骨干的质量，将该质量乘以1/3后，按照0.2～0.4g/mL向离心管中添加裂解液；将混合液在低温下震荡后静置；将悬浊液置于4℃、3000～5000rpm的条件下离心，将上清液吸至新的离心管后，分装保存。本发明中的提取与分离工艺简单且分离出的蛋白质纯度高，因此，该提取与分离的工艺适合在生物学领域推广应用。

公开(公告)号：CN106967788A

公开(公告)日：2017-07-21

申请号：CN201710192378.X

申请日：2017-03-28

Applicant: 南京中医药大学

Inventor： 袁翰 ,  黄桂成

IPC: C12Q1/66 ,  C12Q1/42 ,  C12Q1/02

CPC classification number: C12Q1/66 ,  C12Q1/42 ,  C12Q2304/60 ,  C12Q2334/10 ,  G01N33/502 ,  G01N2333/916 ,  G01N2500/04 ,  G01N2500/10 ,  G01N2800/108

Abstract: 一种基于萤光素校正的细胞碱性磷酸酶活性检测方法在药物筛选中的应用，本发明属于生物医药领域，涉及一种检测细胞中碱性磷酸酶活力的方法，包括以下步骤：A、对培养的细胞进行基因工程修饰，导入非分泌型萤光素酶报告基因；B、加入药物干预C、吸弃培养液并洗涤，加入细胞裂解液裂解细胞，得到细胞裂解液；D、检测E、计算等步骤。本发明提供的技术方案通过结合萤光素酶报告基因手段达到量化细胞活力量化的目的，从而指示药物干预中细胞碱性磷酸酶活力和细胞活力两个维度的信息，并最终形成参数化指标反映不同药物对单个细胞碱性磷酸酶活力的影响。