公开(公告)号：CN117947007B

公开(公告)日：2025-05-09

申请号：CN202311508829.8

申请日：2023-11-13

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 郝宁 ,  段雅玲 ,  郭格格 ,  李涛 ,  刘兆星

IPC: C12N9/54 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种基于重组表达提高纳豆激酶产量的方法，通过构建表达质粒pMA5‑NK，将其转化到枯草芽孢杆菌WB800中，得到重组枯草芽孢杆菌菌株。将基因工程菌接种至种子培养基中进行种子活化，种子培养基包括如下组分：蛋白胨10~15 g/L，酵母提取物20~25 g/L，K2HPO4 1~5 g/L，KH2PO4 1~5 g/L，甘油4~8 g/L，pH值为6.0~8.0；将活化后的种子液接种至发酵培养基中进行发酵培养，得到发酵菌液，发酵培养基包括如下组分：乳糖10~15 g/L，糖蜜10~15 g/L，豆粕粉10~15 g/L，蛋白胨10~15 g/L，K2HPO4 1~2 g/L，KH2PO4 1~2 g/L，MgSO4 0.5~1 g/L，CaCl2 0.2~1 g/L，ZnSO4 0.01~0.05 g/L，pH值为pH值为6.0~8.0。本发明通过发酵后期添加氨基酸和食品级吐温‑80，使纳豆激酶的产酶量达到9763.8 IU/mL，为纳豆激酶的生产的提供了新方法，具有广阔应用前景。

公开(公告)号：CN118773104B

公开(公告)日：2025-04-04

申请号：CN202410904724.2

申请日：2024-07-08

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 郝宁 ,  段雅玲 ,  李涛 ,  郭格格 ,  刘兆星

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/75 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/52 ,  C12N15/31 ,  C12P7/26 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种耐受高浓度乙偶姻的基因工程菌及其构建方法与应用，以枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）13932为原始出发菌株，敲除乙偶姻分解代谢关键基因bdhA，再对生物素转运蛋白bioY以及脯氨酸转运蛋白opuE进行过表达，以获得具有高产量和耐受高浓度乙偶姻的基因工程菌株。过表达bioY和opuE的基因工程菌株乙偶姻产量分别达到80.89 g/L和84.93g/L，且对乙偶姻的耐受能力也得到了增强。最后构建了对bioY和opuE进行共表达的的基因工程菌株，显著提高了重组菌株在乙偶姻胁迫压力下的生长情况，相较于出发菌株B.subtilis 13932，比生长速率提高了29.6%；其乙偶姻发酵产量达到88.76g/L，较B.subtilis 13932ΔbdhA提高了39.4%。本发明构建得到的耐受高浓度乙偶姻的基因工程菌具有重要的理论和实际意义，具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN117947007A

公开(公告)日：2024-04-30

申请号：CN202311508829.8

申请日：2023-11-13

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 郝宁 ,  段雅玲 ,  郭格格 ,  李涛 ,  刘兆星

IPC: C12N9/54 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种基于重组表达提高纳豆激酶产量的方法，通过构建表达质粒pMA5‑NK，将其转化到枯草芽孢杆菌WB800中，得到重组枯草芽孢杆菌菌株。将基因工程菌接种至种子培养基中进行种子活化，种子培养基包括如下组分：蛋白胨10~15 g/L，酵母提取物20~25 g/L，K2HPO41~5 g/L，KH2PO41~5 g/L，甘油4~8 g/L，pH值为6.0~8.0；将活化后的种子液接种至发酵培养基中进行发酵培养，得到发酵菌液，发酵培养基包括如下组分：乳糖10~15 g/L，糖蜜10~15 g/L，豆粕粉10~15 g/L，蛋白胨10~15 g/L，K2HPO41~2 g/L，KH2PO41~2 g/L，MgSO40.5~1 g/L，CaCl20.2~1 g/L，ZnSO40.01~0.05 g/L，pH值为pH值为6.0~8.0。本发明通过发酵后期添加氨基酸和食品级吐温‑80，使纳豆激酶的产酶量达到9763.8 IU/mL，为纳豆激酶的生产的提供了新方法，具有广阔应用前景。

公开(公告)号：CN118773104A

公开(公告)日：2024-10-15

申请号：CN202410904724.2

申请日：2024-07-08

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 郝宁 ,  段雅玲 ,  李涛 ,  郭格格 ,  刘兆星

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/75 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/52 ,  C12N15/31 ,  C12P7/26 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种耐受高浓度乙偶姻的基因工程菌及其构建方法与应用，以枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）13932为原始出发菌株，敲除乙偶姻分解代谢关键基因bdhA，再对生物素转运蛋白bioY以及脯氨酸转运蛋白opuE进行过表达，以获得具有高产量和耐受高浓度乙偶姻的基因工程菌株。过表达bioY和opuE的基因工程菌株乙偶姻产量分别达到80.89 g/L和84.93g/L，且对乙偶姻的耐受能力也得到了增强。最后构建了对bioY和opuE进行共表达的的基因工程菌株，显著提高了重组菌株在乙偶姻胁迫压力下的生长情况，相较于出发菌株B.subtilis 13932，比生长速率提高了29.6%；其乙偶姻发酵产量达到88.76g/L，较B.subtilis 13932ΔbdhA提高了39.4%。本发明构建得到的耐受高浓度乙偶姻的基因工程菌具有重要的理论和实际意义，具有广泛的应用前景。