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公开(公告)号：CN103540570B
公开(公告)日：2015-09-23
申请号：CN201310528691.8
申请日：2013-10-30
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种定点突变改造的三磷酸胞苷合成酶，其氨基酸序列如SEQ IDNO：2所示。它是由氨基酸序列为SEQ ID NO：3所示的来源于谷氨酸棒杆菌ATCC13032的三磷酸胞苷合成酶进行定点突变改造得到，其第160位氨基酸由天冬氨酸突变成了谷氨酸，第162位氨基酸由谷氨酸突变成了丙氨酸，第168位氨基酸由谷氨酸突变成了赖氨酸。本发明所述的基因工程CTP合成酶大大降低了产物CTP对该酶的抑制，而且催化活力更加优良，为实现大规模生产CTP奠定了基础。
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公开(公告)号：CN103540570A
公开(公告)日：2014-01-29
申请号：CN201310528691.8
申请日：2013-10-30
Applicant: 南京工业大学
CPC classification number: C12N9/93 , C12P19/305 , C12Y603/04002
Abstract: 本发明公开了一种定点突变改造的三磷酸胞苷合成酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。它是由氨基酸序列为SEQ ID NO：3所示的来源于谷氨酸棒杆菌ATCC13032的三磷酸胞苷合成酶进行定点突变改造得到，其第160位氨基酸由天冬氨酸突变成了谷氨酸，第162位氨基酸由谷氨酸突变成了丙氨酸，第168位氨基酸由谷氨酸突变成了赖氨酸。本发明所述的基因工程CTP合成酶大大降低了产物CTP对该酶的抑制，而且催化活力更加优良，为实现大规模生产CTP奠定了基础。
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公开(公告)号：CN101962661A
公开(公告)日：2011-02-02
申请号：CN201010213724.6
申请日：2010-06-29
Applicant: 南京工业大学
IPC: C12P7/62
Abstract: 本发明公开了一种氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的羰酰还原酶在4-氯乙酰乙酸乙酯不对称还原制备(S)-4-氯-3羟基丁酸乙酯中的应用。即以氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的羰酰还原酶为催化剂，以4-氯乙酰乙酸乙酯为底物，以NADH为辅因子，不对称还原制备(S)-4-氯-3羟基丁酸乙酯。本发明首次将氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的羰酰还原酶应用于4-氯乙酰乙酸乙酯不对称还原制备(S)-4-氯-3羟基丁酸乙酯中，取得很好的效果，其酶活高达15U/mg，其对底物的得率高达91％，产物的对映体过量值为100％，且产量高，大大降低了生产成本。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102321564B
公开(公告)日：2014-04-23
申请号：CN201110260211.5
申请日：2011-09-05
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种高效表达三磷酸胞苷合成酶的基因工程菌，其分类命名为大肠埃希氏菌(Escherichia？coli)，该菌株已于2011年7月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC？No.5048。本发明还公开了上述基因工程菌的构建方法及其应用。本发明首次将谷氨酸棒杆菌ATCC13032中三磷酸胞苷合成酶基因pyrG在大肠杆菌Rosetta中高效表达。重组的基因工程菌株能够高效表达三磷酸胞苷合成酶基因pyrG，分泌表达三磷酸胞苷合成酶，IPTG诱导表达重组大肠杆菌，酶活为10U/mg；乳糖自诱导表达重组大肠杆菌，酶活为7U/mg。
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公开(公告)号：CN102304490B
公开(公告)日：2013-07-10
申请号：CN201110260265.1
申请日：2011-09-05
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种高效表达乳清酸磷酸核糖转移酶和乳清苷酸脱羧酶的重组菌，其分类命名为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)，该菌株已于2011年7月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5047。本发明还公开了上述重组菌的构建方法和应用。本发明首次将谷氨酸棒杆菌中的乳清酸磷酸核糖转移酶基因OPRTase pyrE和乳清苷酸脱羧酶基因ODCase pyrF在大肠杆菌中高效共表达。IPTG诱导表达重组大肠杆菌，将破碎后收集的粗酶液经Ni柱纯化后，进行酶反应，OPRTase和ODCase的酶活分别为9U/mg和12U/mg蛋白。
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公开(公告)号：CN101962661B
公开(公告)日：2012-05-23
申请号：CN201010213724.6
申请日：2010-06-29
Applicant: 南京工业大学
IPC: C12P7/62
Abstract: 本发明公开了一种氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的羰酰还原酶在4-氯乙酰乙酸乙酯不对称还原制备(S)-4-氯-3羟基丁酸乙酯中的应用。即以氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的羰酰还原酶为催化剂，以4-氯乙酰乙酸乙酯为底物，以NADH为辅因子，不对称还原制备(S)-4-氯-3羟基丁酸乙酯。本发明首次将氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的羰酰还原酶应用于4-氯乙酰乙酸乙酯不对称还原制备(S)-4-氯-3羟基丁酸乙酯中，取得很好的效果，其酶活高达15U/mg，其对底物的得率高达91％，产物的对映体过量值为100％，且产量高，大大降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102321564A
公开(公告)日：2012-01-18
申请号：CN201110260211.5
申请日：2011-09-05
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种高效表达三磷酸胞苷合成酶的基因工程菌，其分类命名为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)，该菌株已于2011年7月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5048。本发明还公开了上述基因工程菌的构建方法及其应用。本发明首次将谷氨酸棒杆菌ATCC13032中三磷酸胞苷合成酶基因pyrG在大肠杆菌Rosetta中高效表达。重组的基因工程菌株能够高效表达三磷酸胞苷合成酶基因pyrG，分泌表达三磷酸胞苷合成酶，IPTG诱导表达重组大肠杆菌，酶活为10U/mg；乳糖自诱导表达重组大肠杆菌，酶活为7U/mg。
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公开(公告)号：CN102304490A
公开(公告)日：2012-01-04
申请号：CN201110260265.1
申请日：2011-09-05
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种高效表达乳清酸磷酸核糖转移酶和乳清苷酸脱羧酶的重组菌，其分类命名为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)，该菌株已于2011年7月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5047。本发明还公开了上述重组菌的构建方法和应用。本发明首次将谷氨酸棒杆菌中的乳清酸磷酸核糖转移酶基因OPRTase pyrE和乳清苷酸脱羧酶基因ODCase pyrF在大肠杆菌中高效共表达。IPTG诱导表达重组大肠杆菌，将破碎后收集的粗酶液经Ni柱纯化后，进行酶反应，OPRTase和ODCase的酶活分别为9U/mg和12U/mg蛋白。
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