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公开(公告)号：CN111707645A
公开(公告)日：2020-09-25
申请号：CN202010063061.8
申请日：2020-01-19
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种检测凋落物乙酰氨基葡萄糖苷酶活性的方法，属于酶活检测技术领域。本发明提供的方法为：将凋落物样品破碎后装到离心过滤管中，添加培养缓冲液低温培养后高速离心并混合滤液定容至一定体积，制备灭活酶液；将酶活性液和灭活酶液依次分别添加酶活性孔和阴性对照孔，再添加4-MUB-β-D-乙酰氨基葡萄糖苷工作液，在遮光条件下震荡培养；培养后，向所有酶标孔添加Tris终止液；利用多功能酶标仪进行MUB荧光检测；计算乙酰氨基葡萄糖苷酶比酶活。本发明采用离心过滤管，降低了酶液中的干扰物质；优化了反应体系，灵敏度高，酶液耗量少，反应终止后，测试液pH对上机数据没有影响，真实有效反映凋落物中酶活性。
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公开(公告)号：CN111705108A
公开(公告)日：2020-09-25
申请号：CN202010063064.1
申请日：2020-01-19
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12Q1/34
Abstract: 本发明公开了一种检测凋落物β-葡萄糖苷酶活性的方法，属于生物化学技术领域。本发明提供的检测凋落物中β-葡萄糖苷酶活性的方法主要步骤为：称取剪碎过筛的凋落物到离心过滤管中，加入培养缓冲液进行孵育，高速离心后混合上清液并调节至一定体积作为酶活待测液；将酶活待测液和灭活的酶活待测液分别加入样品活性孔和阴性对照孔，再加入荧光底物工作液4-MUB-β-D-葡萄糖苷溶液，在避光条件下震荡孵育；再向酶标孔加入Tris终止液；采用多功能酶标仪进行荧光检测；计算β-葡萄糖苷酶活性。本发明的优点为：反应体系优化后，灵敏度高，检测消耗待测酶液的量少，缩短了操作时间，短时间内能大批量获得测定数据，操作简单，效率高。
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公开(公告)号：CN111057782A
公开(公告)日：2020-04-24
申请号：CN202010063347.6
申请日：2020-01-19
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6851 , C12Q1/06
Abstract: 本发明公开了一种基于实时荧光定量PCR检测土壤细菌数量的方法，属于生物技术领域。本方法包括以下步骤：1)提取土壤样品总DNA并调整到预设浓度，制备成待测土壤样品模板DNA溶液；2)提取模板大肠杆菌总DNA，测定DNA浓度，并制备标准曲线模板DNA溶液；3)对待测土壤样品模板DNA溶液和标准曲线模板DNA溶液进行实时荧光定量PCR扩增；4)绘制出标准曲线；5)计算每克干土中细菌数量。本方法省去添加内标菌株荧光镜检等步骤，大大降低操作难度；且不需要经过连接、转化，再以qPCR扩增，操作简便易学；目标片段特异性好，数据精准度高，重现性好。
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公开(公告)号：CN112210586B
公开(公告)日：2023-12-29
申请号：CN202010062495.6
申请日：2020-01-19
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种检测凋落物β‑葡萄糖醛酸苷酶活性的方法，涉及凋落物酶活性检测的技术领域。该方法包括以下步骤：1)在凋落物碎屑中加入培养缓冲液，低温孵育，离心收集滤液，进一步稀释得到酶活测试液；并制备灭活对照酶液；2)制作MUB浓度与吸光值之间关系的标准曲线；3)将酶活测试液和灭活对照酶液分别添加到酶活测试孔和阴性孔，然后加入4‑MUB‑β‑D‑葡萄糖醛酸苷工作液，避光震荡孵育，反应结束后加入终止液终止反应，在检测条件下，读取荧光值；4)根据标准曲线，计算β‑葡萄糖醛酸苷酶比酶活。本发明酶液耗量少、操作强度小；灵敏度呈数量级提高；且测试液pH对上机数据没有影响，能够真实反映凋落物中酶活性。
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公开(公告)号：CN111707645B
公开(公告)日：2023-05-16
申请号：CN202010063061.8
申请日：2020-01-19
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12Q1/34
Abstract: 本发明公开了一种检测凋落物乙酰氨基葡萄糖苷酶活性的方法，属于酶活检测技术领域。本发明提供的方法为：将凋落物样品破碎后装到离心过滤管中，添加培养缓冲液低温培养后高速离心并混合滤液定容至一定体积，制备灭活酶液；将酶活性液和灭活酶液依次分别添加酶活性孔和阴性对照孔，再添加4‑MUB‑β‑D‑乙酰氨基葡萄糖苷工作液，在遮光条件下震荡培养；培养后，向所有酶标孔添加Tris终止液；利用多功能酶标仪进行MUB荧光检测；计算乙酰氨基葡萄糖苷酶比酶活。本发明采用离心过滤管，降低了酶液中的干扰物质；优化了反应体系，灵敏度高，酶液耗量少，反应终止后，测试液pH对上机数据没有影响，真实有效反映凋落物中酶活性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111705108B
公开(公告)日：2023-12-19
申请号：CN202010063064.1
申请日：2020-01-19
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12Q1/34
Abstract: 本发明公开了一种检测凋落物β‑葡萄糖苷酶活性的方法，属于生物化学技术领域。本发明提供的检测凋落物中β‑葡萄糖苷酶活性的方法主要步骤为：称取剪碎过筛的凋落物到离心过滤管中，加入培养缓冲液进行孵育，高速离心后混合上清液并调节至一定体积作为酶活待测液；将酶活待测液和灭活的酶活待测液分别加入样品活性孔和阴性对照孔，再加入荧光底物工作液4‑MUB‑β‑D‑葡萄糖苷溶液，在避光条件下震荡孵育；再向酶标孔加入Tris终止液；采用多功能酶标仪进行荧光检测；计算β‑葡萄糖苷酶活性。本发明的优点为：反应体系优化后，灵敏度高，检测消耗待测酶液的量少，缩短了操作时间，短时间内能大批量获得测定数据，操作简单，效率高。
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公开(公告)号：CN111551527B
公开(公告)日：2023-03-17
申请号：CN202010063348.0
申请日：2020-01-19
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12Q1/34
Abstract: 本发明公开了一种检测凋落物β‑木糖苷酶活性的方法，涉及凋落物酶活性检测的技术领域。该方法包括以下步骤：1)在凋落物碎屑中加入培养缓冲液，低温孵育，离心收集滤液，进一步稀释得到待测酶液；并制备灭活酶液；2)制作MUB共轭木糖苷底物浓度与吸光值之间关系的标准曲线；3)将待测酶液和灭活酶液分别加入酶活力孔和阴性对照孔，再加入荧光共轭木糖苷工作液，避光震荡孵育，反应结束后加入终止液终止反应，在检测条件下，读取荧光值；4)根据标准曲线，运算β‑木糖苷酶比酶活。本发明对反应体系进行了优化，检测指标减少，反应酶液和试剂耗损少；灵敏度呈数量级提高；适用于酶含量较低的凋落物的β‑木糖苷酶活力测定。
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公开(公告)号：CN111235219B
公开(公告)日：2023-02-28
申请号：CN202010063982.4
申请日：2020-01-19
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种检测凋落物中漆酶活性的方法，属于酶活检测技术领域。本发明提供的检测凋落物中漆酶活性的方法：称取过筛的凋落物碎屑到离心过滤管中，加入培养缓冲液低温孵育，高速离心后将酶滤液混合并调节至一定体积；将上步稀释的酶液避光条件下加热制作对照灭活酶液；将待测稀释酶液和对照灭活酶液分别加入酶活孔和阴性孔，再加入ABTS底物工作液，避光条件下，22℃震荡孵育；测定420nm波长下的吸光值OD；计算稀释因子F；计算漆酶活性。本发明的优点为：采用微小孔径离心过滤管，大大降低了酶液中的干扰物质；反应体系优化后，各处理反应条件一致，灵敏度高，结果可靠；批量获得结果数据，上机时间缩短，效率高效。
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公开(公告)号：CN112210586A
公开(公告)日：2021-01-12
申请号：CN202010062495.6
申请日：2020-01-19
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种检测凋落物β‑葡萄糖醛酸苷酶活性的方法，涉及凋落物酶活性检测的技术领域。该方法包括以下步骤：1)在凋落物碎屑中加入培养缓冲液，低温孵育，离心收集滤液，进一步稀释得到酶活测试液；并制备灭活对照酶液；2)制作MUB浓度与吸光值之间关系的标准曲线；3)将酶活测试液和灭活对照酶液分别添加到酶活测试孔和阴性孔，然后加入4‑MUB‑β‑D‑葡萄糖醛酸苷工作液，避光震荡孵育，反应结束后加入终止液终止反应，在检测条件下，读取荧光值；4)根据标准曲线，计算β‑葡萄糖醛酸苷酶比酶活。本发明酶液耗量少、操作强度小；灵敏度呈数量级提高；且测试液pH对上机数据没有影响，能够真实反映凋落物中酶活性。
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公开(公告)号：CN111057751A
公开(公告)日：2020-04-24
申请号：CN202010063983.9
申请日：2020-01-19
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12Q1/6851 , C12Q1/06 , C12R1/645
Abstract: 本发明公开了一种基于实时荧光定量PCR检测土壤真菌数量的方法，属于土壤真菌数量检测领域。本发明公开的方法主要包括：称取过筛的新鲜土壤，利用试剂盒提取土壤总DNA，统一稀释到一定浓度；将生长适度的模板射纹革菌的菌丝利用CTAB法提取总DNA，制备成标准曲线系列模板DNA溶液；将标准曲线或待测土壤模板DNA溶液构建qPCR反应体系，包括根据真菌18S核糖体rRNA保守序列设计的通用qPCR引物；利用ABI7500实时荧光定量PCR仪进行qPCR反应；绘制出标准曲线；计算每克干土中真菌数量。本发明提供的检测土壤真菌数量的方法，操作安全简便，引物序列特异性好，灵敏度高，结果精准可靠，重现性好。
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