公开(公告)号：CN105219807A

公开(公告)日：2016-01-06

申请号：CN201510730985.8

申请日：2015-11-02

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 欧阳嘉 ,  臧颖 ,  郑兆娟 ,  李鑫 ,  朱均均 ,  徐勇 ,  勇强

IPC: C12P7/40 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种选择性分离苯丙氨酸生物转化液中肉桂酸及循环利用转化液的方法，苯丙氨酸生物转化液经固液分离分别得到清液I与细胞菌体；将清液I用酸调节pH值至4.5，在室温下搅拌处理至白色沉淀析出；上述混合体系经固液分离得到清液II与沉淀，沉淀经洗涤、冷冻干燥得到肉桂酸样品；清液II用碱调节pH值至生物转化所需pH，再与前述细胞菌体混合，继续进行生物转化制备肉桂酸。采用本发明方法，可以降低底物抑制作用并使转化液和细胞可循环利用的方法，产率最高可达95％，产品纯度可达98％以上。该方法不仅过程简易，可大大降低提取成本，还可实现得静息细胞和转化液多次循环利用。

公开(公告)号：CN106480006B

公开(公告)日：2019-09-10

申请号：CN201610951756.3

申请日：2016-10-27

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 欧阳嘉 ,  梅文鼎 ,  郑兆娟 ,  臧颖 ,  勇强 ,  李鑫

IPC: C12N9/90 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P19/24 ,  C12P19/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种L‑阿拉伯糖异构酶，它是通过将凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans NL01)的L‑阿拉伯糖异构酶第279位苯丙氨酸突变为异亮氨酸而得到；其中，所述的L‑阿拉伯糖异构酶基因araA，其核苷酸序列的GenBank登记号为KX356659。本发明还公开了包含上述L‑阿拉伯糖异构酶的大肠杆菌及其构建方法和应用。本发明构建的重组大肠杆菌，其表达的F279I对D‑半乳糖催化效率高。全细胞催化法反应体系最适反应温度温和，不会带来褐变反应，比野生型L‑AI和其他常用的来自嗜热菌和极端嗜热菌的L‑AI更有利于D‑塔格糖的工业化生产。同时全细胞催化法反应体系成分简单，有较大的工业化生产、应用潜力和经济价值。

公开(公告)号：CN105219807B

公开(公告)日：2019-01-22

申请号：CN201510730985.8

申请日：2015-11-02

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 欧阳嘉 ,  臧颖 ,  郑兆娟 ,  李鑫 ,  朱均均 ,  徐勇 ,  勇强

IPC: C12P7/40 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种选择性分离苯丙氨酸生物转化液中肉桂酸及循环利用转化液的方法，苯丙氨酸生物转化液经固液分离分别得到清液I与细胞菌体；将清液I用酸调节pH值至4.5，在室温下搅拌处理至白色沉淀析出；上述混合体系经固液分离得到清液II与沉淀，沉淀经洗涤、冷冻干燥得到肉桂酸样品；清液II用碱调节pH值至生物转化所需pH，再与前述细胞菌体混合，继续进行生物转化制备肉桂酸。采用本发明方法，可以降低底物抑制作用并使转化液和细胞可循环利用的方法，产率最高可达95％，产品纯度可达98％以上。该方法不仅过程简易，可大大降低提取成本，还可实现得静息细胞和转化液多次循环利用。

公开(公告)号：CN103468665B

公开(公告)日：2015-12-23

申请号：CN201310464644.1

申请日：2013-10-08

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 欧阳嘉 ,  臧颖 ,  郑兆娟 ,  李鑫 ,  朱均均 ,  徐勇 ,  勇强

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/63 ,  C12N1/21 ,  C12P7/40

Abstract: 本发明公开了一种玉米苯丙氨酸解氨酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，其编码的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明还公开了上述玉米苯丙氨酸解氨酶在生物法合成肉桂酸中的应用。将本发明提供的玉米苯丙氨酸解氨酶ZmPAL基因构建到大肠杆菌表达载体并转化入大肠杆菌细胞进行原核表达，可用于高比活植物苯丙氨酸解氨酶的生产。获得的重组玉米苯丙氨酸解氨酶能够催化L-苯丙氨酸去氨基生产肉桂酸，为全生物合成制备肉桂酸提供了可能，具有很高的工业应用价值。

公开(公告)号：CN106480006A

公开(公告)日：2017-03-08

申请号：CN201610951756.3

申请日：2016-10-27

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 欧阳嘉 ,  梅文鼎 ,  郑兆娟 ,  臧颖 ,  勇强 ,  李鑫

IPC: C12N9/90 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P19/24 ,  C12P19/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种L-阿拉伯糖异构酶，它是通过将凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans NL01)的L-阿拉伯糖异构酶第279位苯丙氨酸突变为异亮氨酸而得到；其中，所述的L-阿拉伯糖异构酶基因araA，其核苷酸序列的GenBank登记号为KX356659。本发明还公开了包含上述L-阿拉伯糖异构酶的大肠杆菌及其构建方法和应用。本发明构建的重组大肠杆菌，其表达的F279I对D-半乳糖催化效率高。全细胞催化法反应体系最适反应温度温和，不会带来褐变反应，比野生型L-AI和其他常用的来自嗜热菌和极端嗜热菌的L-AI更有利于D-塔格糖的工业化生产。同时全细胞催化法反应体系成分简单，有较大的工业化生产、应用潜力和经济价值。

公开(公告)号：CN103468665A

公开(公告)日：2013-12-25

申请号：CN201310464644.1

申请日：2013-10-08

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 欧阳嘉 ,  臧颖 ,  郑兆娟 ,  李鑫 ,  朱均均 ,  徐勇 ,  勇强

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/63 ,  C12N1/21 ,  C12P7/40

Abstract: 本发明公开了一种玉米苯丙氨酸解氨酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，其编码的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明还公开了上述玉米苯丙氨酸解氨酶在生物法合成肉桂酸中的应用。将本发明提供的玉米苯丙氨酸解氨酶ZmPAL基因构建到大肠杆菌表达载体并转化入大肠杆菌细胞进行原核表达，可用于高比活植物苯丙氨酸解氨酶的生产。获得的重组玉米苯丙氨酸解氨酶能够催化L-苯丙氨酸去氨基生产肉桂酸，为全生物合成制备肉桂酸提供了可能，具有很高的工业应用价值。