公开(公告)号：CN111218499B

公开(公告)日：2021-01-26

申请号：CN202010106601.6

申请日：2020-02-20

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 席梦利 ,  尚大鑫 ,  刘光欣 ,  辛昊阳 ,  赵乙琏 ,  鹿东东 ,  宁仪杭

IPC: C12Q1/6841

Abstract: 本发明公开一种基于冰冻切片的杨树根尖3D荧光原位杂交方法，属于分子细胞遗传学领域。本方法包括：获取杨树根尖，用卡诺固定液固定后水洗，再用包埋剂将其包埋并冷冻后切片，将切片粘附到载玻片上，随后经过烤片、变性、杂交、抗体检测等FISH步骤，最后在激光共聚焦显微镜下观察并捕获3D图像。本发明提供的方法可以获得根尖完整的组织结构且FISH信号清晰，相比传统制片方法获得的2D FISH结果，本发明的方法可以在三维水平直观展示染色体在细胞中的真实空间占位，以及在三维水平准确定位靶序列在细胞中的空间分布，可应用于杨树的染色体空间占位、基因表达及Hi‑C测序结果的分析等领域，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN111235231B

公开(公告)日：2020-12-22

申请号：CN202010090059.X

申请日：2020-02-12

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 席梦利 ,  赵乙琏 ,  辛昊阳 ,  鹿东东 ,  刘光欣 ,  尚大鑫 ,  宁仪杭

IPC: C12Q1/6841

Abstract: 本发明公开一种基于石蜡切片的杨树根尖3D荧光原位杂交方法，属于分子细胞遗传学领域。本方法主要包括：获取杨树幼嫩根尖，用卡诺固定液固定；正丁醇梯度溶液脱水、浸蜡、包埋；切片、展片、烤片及脱蜡；制片用果胶酶、纤维素酶、胃蛋白酶及RNA酶处理；制片及探针变性、杂交过夜；二抗孵育后检测杂交信号。本发明所提供的方法可以获得杨树根尖石蜡切片清晰的FISH信号，使用激光共聚焦显微镜捕获的3D图像可以准确反映靶序列在细胞中三维水平的空间分布。本发明的方法可用于杨树的染色体空间占位、基因表达及Hi‑C测序结果的分析等研究领域，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN111218499A

公开(公告)日：2020-06-02

申请号：CN202010106601.6

申请日：2020-02-20

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 尚大鑫 ,  席梦利 ,  刘光欣 ,  辛昊阳 ,  赵乙琏 ,  鹿东东 ,  宁仪杭

IPC: C12Q1/6841

Abstract: 本发明公开一种基于冰冻切片的杨树根尖3D荧光原位杂交方法，属于分子细胞遗传学领域。本方法包括：获取杨树根尖，用卡诺固定液固定后水洗，再用包埋剂将其包埋并冷冻后切片，将切片粘附到载玻片上，随后经过烤片、变性、杂交、抗体检测等FISH步骤，最后在激光共聚焦显微镜下观察并捕获3D图像。本发明提供的方法可以获得根尖完整的组织结构且FISH信号清晰，相比传统制片方法获得的2D FISH结果，本发明的方法可以在三维水平直观展示染色体在细胞中的真实空间占位，以及在三维水平准确定位靶序列在细胞中的空间分布，可应用于杨树的染色体空间占位、基因表达及Hi-C测序结果的分析等领域，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN111235231A

公开(公告)日：2020-06-05

申请号：CN202010090059.X

申请日：2020-02-12

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 席梦利 ,  赵乙琏 ,  辛昊阳 ,  鹿东东 ,  刘光欣 ,  尚大鑫 ,  宁仪杭

IPC: C12Q1/6841

Abstract: 本发明公开一种基于石蜡切片的杨树根尖3D荧光原位杂交方法，属于分子细胞遗传学领域。本方法主要包括：获取杨树幼嫩根尖，用卡诺固定液固定；正丁醇梯度溶液脱水、浸蜡、包埋；切片、展片、烤片及脱蜡；制片用果胶酶、纤维素酶、胃蛋白酶及RNA酶处理；制片及探针变性、杂交过夜；二抗孵育后检测杂交信号。本发明所提供的方法可以获得杨树根尖石蜡切片清晰的FISH信号，使用激光共聚焦显微镜捕获的3D图像可以准确反映靶序列在细胞中三维水平的空间分布。本发明的方法可用于杨树的染色体空间占位、基因表达及Hi-C测序结果的分析等研究领域，具有广阔的应用前景。