公开(公告)号：CN105779481B

公开(公告)日：2019-01-11

申请号：CN201610219972.9

申请日：2016-04-07

Applicant: 南宁中诺生物工程有限责任公司

Inventor： 廖东庆 ,  黄日波 ,  李晓明 ,  韦航 ,  韦旭钦 ,  王青艳

IPC: C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种外源基因DNA片段克隆到质粒载体相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点的方法。质粒载体用限制性内切酶A\B、A\C分别酶切，得到AB、BA及AC、CA四个DNA片段。(B、C为质粒载体上相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点)。外源基因DNA片段用限制性内切酶B、C酶切，得到BC片段。AB、BC、CA与AC、BC、BA这三个DNA片段分别进行连接、转化，涂布在筛选平板上培养，再挑取单菌落进行筛选，可以得到外源基因连入质粒载体正反两个方向的重组质粒。本发明的优点是：使用本发明构建的质粒载体，无法进行双酶切的相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点也可作为克隆外源基因DNA片段的选择；另外，外源基因DNA片段连入载体的两个方向也可实现。

公开(公告)号：CN105779481A

公开(公告)日：2016-07-20

申请号：CN201610219972.9

申请日：2016-04-07

Applicant: 南宁中诺生物工程有限责任公司

Inventor： 廖东庆 ,  黄日波 ,  李晓明 ,  韦航 ,  韦旭钦 ,  王青艳

IPC: C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种外源基因DNA片段克隆到质粒载体相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点的方法。质粒载体用限制性内切酶A\B、A\C分别酶切，得到AB、BA及AC、CA四个DNA片段。(B、C为质粒载体上相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点)。外源基因DNA片段用限制性内切酶B、C酶切，得到BC片段。AB、BC、CA与AC、BC、BA这三个DNA片段分别进行连接、转化，涂布在筛选平板上培养，再挑取单菌落进行筛选，可以得到外源基因连入质粒载体正反两个方向的重组质粒。本发明的优点是：使用本发明构建的质粒载体，无法进行双酶切的相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点也可作为克隆外源基因DNA片段的选择；另外，外源基因DNA片段连入载体的两个方向也可实现。

公开(公告)号：CN1935991A

公开(公告)日：2007-03-28

申请号：CN200610019452.X

申请日：2006-06-21

Applicant: 南宁中诺生物工程有限责任公司

Inventor： 黄日波 ,  韦宇拓 ,  吴杰群 ,  齐向辉 ,  孟晓蕾 ,  杜丽琴 ,  韦旭钦 ,  王青艳 ,  卢福燊 ,  卢运琨

IPC: C12N9/00 ,  C12N9/02 ,  C12N15/52 ,  C12N1/21 ,  C12P7/18

Abstract: 本发明涉及一种全新的甘油脱水酶基因的克隆及其在相关宿主中的表达，该酶的基因系克隆自产气荚膜梭菌(clostridium perfringens)，它能够在正常的生化反应条件下将甘油转化为3－羟基丙醛。在本发明的基础上，可进一步把1，3－丙二醇氧化还原酶等相关酶基因一起重组到大肠杆菌中，获得一个新的代谢工程菌，这个代谢工程菌可以通过发酵将木薯淀粉的水解物、葡萄糖或甘油转化为1，3－丙二醇。

公开(公告)号：CN1935991B

公开(公告)日：2010-05-12

申请号：CN200610019452.X

申请日：2006-06-21

Applicant: 南宁中诺生物工程有限责任公司

Inventor： 黄日波 ,  韦宇拓 ,  吴杰群 ,  齐向辉 ,  孟晓蕾 ,  杜丽琴 ,  韦旭钦 ,  王青艳 ,  卢福燊 ,  卢运琨

IPC: C12N9/00 ,  C12N9/02 ,  C12N15/52 ,  C12N1/21 ,  C12P7/18

Abstract: 本发明涉及一种全新的甘油脱水酶基因的克隆及其在相关宿主中的表达，该酶的基因系克隆自产气荚膜梭菌(clostridium perfringens)，它能够在正常的生化反应条件下将甘油转化为3-羟基丙醛。在本发明的基础上，可进一步把1，3-丙二醇氧化还原酶等相关酶基因一起重组到大肠杆菌中，获得一个新的代谢工程菌，这个代谢工程菌可以通过发酵将木薯淀粉的水解物、者葡萄糖或甘油转化为1，3-丙二醇。

公开(公告)号：CN105695496A

公开(公告)日：2016-06-22

申请号：CN201610160020.4

申请日：2016-03-21

Applicant: 南宁中诺生物工程有限责任公司

Inventor： 韦旭钦 ,  梁甜 ,  黄日波 ,  韦宇拓 ,  李晓明

IPC: C12N15/70 ,  C12P7/24 ,  C12P7/18 ,  C12P7/42 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12N9/88 ,  C12N9/0006 ,  C12N9/0008 ,  C12P7/18 ,  C12P7/24 ,  C12P7/42 ,  C12Y101/01202 ,  C12Y102/01005 ,  C12Y402/01028

Abstract: 本发明公开了一种二醇脱水酶基因pduCDE的应用。具体是在含有该基因的工程菌在发酵甘油制备3-羟基丙醛、1,3-丙二醇和3-羟基丙酸过程中的应用。该基因首次在大肠杆菌中表达成功，其编码的酶能催化甘油脱水生成3-羟基丙醛，在此发明基础上，可分别把1,3-丙二醇氧化还原酶基因或乙醛脱氢酶基因一起重组到大肠杆菌中，重组菌可以通过发酵将甘油转化为1,3-丙二醇或3-羟基丙酸。

公开(公告)号：CN101265474A

公开(公告)日：2008-09-17

申请号：CN200810073575.0

申请日：2008-05-08

Applicant: 南宁中诺生物工程有限责任公司

Inventor： 黄日波 ,  韦宇拓 ,  吴杰群 ,  杜丽琴 ,  韦旭钦 ,  王青艳 ,  卢福燊 ,  卢运琨

IPC: C12N15/31 ,  C12N15/10 ,  C07K14/195 ,  C12N1/21 ,  C12P7/18 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种全新的甘油脱水酶激活因子基因的克隆及其在相关宿主中的表达，该激活因子的基因系克隆自产气荚膜梭菌(clostridium perfringens)，它能够在正常的生化反应条件下将失活的甘油脱水酶激活，恢复甘油脱水酶的酶活力，也可以使甘油脱水酶在转化甘油的反应过程中不容易失活。在本发明的基础上，可进一步把甘油脱水酶激、1，3－丙二醇氧化还原酶等相关酶基因一起重组到大肠杆菌中，获得一个新的代谢工程菌，这个代谢工程菌可以通过发酵将淀粉、甘油或者葡萄糖转化为1，3－丙二醇。