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公开(公告)号：CN102174464A
公开(公告)日：2011-09-07
申请号：CN201110038865.3
申请日：2011-02-16
Applicant: 南开大学
IPC: C12N5/04
Abstract: 完整叶绿体长时间离体培养方法。本发明分别以黄瓜、烟草和菠菜无菌苗子叶为材料，以柠檬酸、NaCl、Tris和EDTA为主要成分的叶绿体提取试剂，通过对植物材料的研磨、纱布过滤、差速离心等操作分离较完整的叶绿体（图1）；以MnCl2、MgSO4、NaCl、山梨醇等为主要成分的培养试剂，对离体叶绿体进行液体培养。在体外培养长达20天左右，叶绿体仍然保持绿色且显微形态正常（图2），膜结构完整（图3）。离体培养两周内叶绿体经历分裂增值达到相对稳定的数量（图4）。对叶绿体离体转化和外源基因检测证明离体长时间培养的叶绿体内DNA没有发生降解（图5）。本发明可为叶绿体功能、遗传转化和细胞工程等基础理论与应用研究提供便捷和新途径。
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