公开(公告)号：CN101693902B

公开(公告)日：2011-06-08

申请号：CN200910070819.4

申请日：2009-10-16

Applicant: 南开大学

Inventor： 尹芝南 ,  王璞玥 ,  赵立青 ,  张松 ,  罗维

IPC: C12N15/85

Abstract: 一种高效并且合理的完成条件性基因敲除载体的构建方法。包括如下步骤：设计出包含15bp重组序列的左右同源片段L和R以及要敲除的序列M的引物，并PCR扩增出L、R和M，经过三次线性化载体，体外重组酶(In-Fusion Advantage PCR Cloning Kit)重组，转化感受态的步骤，完成最终载体的构建工作。本发明极大的节省了构建时间，且阳性克隆率极高，适合长片段的同源臂。此方法不仅可以用于小鼠条件性基因敲除载体的构建，而且可以用于符合此基因敲除原理的其它物种的条件性基因敲除载体构建工作，同时还可用于基因敲入载体的构建。

公开(公告)号：CN101851657A

公开(公告)日：2010-10-06

申请号：CN201010138847.8

申请日：2010-04-06

Applicant: 南开大学

Inventor： 尹芝南 ,  刘兰珍 ,  温倜 ,  陈曦 ,  赵立青 ,  王璞玥 ,  张宝童

IPC: C12Q1/02 ,  G01N15/10

Abstract: 一种荧光报告基因小鼠T细胞体外培养分化模型及药物筛选方法，以及利用4get(IL-4/GFP-enhanced transcript)小鼠筛选治疗哮喘病药物的具体方法，包括T细胞体外培养分化、同时刻药物高通量筛选及流式细胞仪检测。本发明中的T细胞体外培养分化与药物筛选分别涉及免疫学与化学生物学领域，应用特有的荧光报告基因小鼠在T细胞分化过程中可指示特定细胞因子的产生，具备高通量筛选小分子药物及天然产物提取物的能力。基于该模型的药物筛选平台可用于筛选新药，以及开发一批对机体免疫反应和对T细胞分化、重要细胞因子分泌具有调控作用的药物。

公开(公告)号：CN101693902A

公开(公告)日：2010-04-14

申请号：CN200910070819.4

申请日：2009-10-16

Applicant: 南开大学

Inventor： 尹芝南 ,  王璞玥 ,  赵立青 ,  张松 ,  罗维

IPC: C12N15/85

Abstract: 一种高效并且合理的完成条件性基因敲除载体的构建方法。包括如下步骤：设计出包含15bp重组序列的左右同源片段L和R以及要敲除的序列M的引物，并PCR扩增出L、R和M，经过三次线性化载体，体外重组酶(In-Fusion Advantage PCR Cloning Kit)重组，转化感受态的步骤，完成最终载体的构建工作。本发明极大的节省了构建时间，且阳性克隆率极高，适合长片段的同源臂。此方法不仅可以用于小鼠条件性基因敲除载体的构建，而且可以用于符合此基因敲除原理的其它物种的条件性基因敲除载体构建工作，同时还可用于基因敲入载体的构建。