公开(公告)号：CN104561161A

公开(公告)日：2015-04-29

申请号：CN201410803002.4

申请日：2014-12-22

Applicant: 厦门大学

Inventor： 方柏山 ,  江伟 ,  王世珍

IPC: C12P13/04 ,  C12P13/00 ,  C12N1/21 ,  C12N9/04 ,  C12R1/19

Abstract: 一种海洋酶催化不对称还原制备手性叔亮氨酸的方法及酶，属于生物法不对称合成手性化合物技术领域。本发明筛选得到亮氨酸脱氢酶来源于柴油食烷菌(Alcanivorax dieselolei)，经过菌株培养，基因克隆，构建工程菌，细胞制备，在加入氨基供体和辅助底物情况下，细胞催化三甲基丙酮酸不对称还原胺化得到产物手性叔亮氨酸。本发明确定了基于该酶所构建工程菌的全细胞催化三甲基丙酮酸不对称还原胺化的反应体系和反应条件。本发明操作方便，设备简单，在生物催化制备手性叔亮氨酸领域具有较好的工业应用前景，对于今后生物催化专用酶源的开发和手性化合物合成方法的研究具有较为重要的意义。

公开(公告)号：CN105154488A

公开(公告)日：2015-12-16

申请号：CN201510690731.8

申请日：2015-10-22

Applicant: 厦门大学

Inventor： 方柏山 ,  江伟

IPC: C12P13/06 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21

Abstract: 本发明公开了一种基于生物砖串联双酶制备L-叔亮氨酸的方法，包括如下步骤：(1)构建能够串联表达亮氨酸脱氢酶和甲酸脱氢酶的串联生物砖元件；(2)将上述串联生物砖元件导入大肠杆菌，构建基于串联表达亮氨酸脱氢酶和甲酸脱氢酶的E.coli工程菌；(3)将上述E.coli工程菌接种于含氯霉素的液体扩大培养基中进行培养及诱导表达，获得发酵液，冷冻离心获得细胞，用缓冲液重悬、洗涤、配制成细胞液；(4)将上述细胞液、三甲基丙酮酸、氨基供体、辅酶和用于辅酶再生的辅助底物置于缓冲体系中震荡反应，利用全细胞催化不对称还原胺化得到产物L-叔亮氨酸。本发明的方法产品转化率高，手性选择性较好，反应条件温和，操作简单，昂贵的辅酶可再生，单细胞表达双酶节约成本。

公开(公告)号：CN104726514A

公开(公告)日：2015-06-24

申请号：CN201510165635.1

申请日：2015-04-09

Applicant: 厦门大学

Inventor： 方柏山 ,  江伟 ,  王世珍

IPC: C12P13/22 ,  C12R1/07

CPC classification number: Y02P20/584

Abstract: 本发明公开了一种酶催化不对称还原制备手性苯丙氨酸的方法，包括以下步骤：(1)基因组DNA的提取；(2)基因克隆及工程菌的制备；(3)细胞液制备：(4)全细胞催化反应：在步骤3)的细胞液中，加入苯丙酮酸和氨基供体作为底物，加入辅助底物用于辅酶循环再生，利用全细胞催化不对称还原胺化得到产物手性苯丙氨酸。本发明的方法采用全细胞催化苯丙酮酸不对称还原胺化获得手性苯丙氨酸，具有反应路线简洁，易实现辅酶再生等优点。