公开(公告)号：CN110161246A

公开(公告)日：2019-08-23

申请号：CN201910449511.4

申请日：2019-05-28

Applicant: 吉林大学

Inventor： 丁壮 ,  林洪哲 ,  李金斗 ,  丁佳欣 ,  徐小洪 ,  钱晶 ,  尹仁福 ,  丁伟

IPC: G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  G01N33/543 ,  C07K16/10

Abstract: 区分新城疫病毒样颗粒疫苗免疫血清与野毒感染血清的间接竞争ELISA方法及试剂盒，属于病毒检测领域。本发明以NP蛋白为免疫抗原，以单克隆抗体为抗体诊断试剂，利用棋盘法对包被抗原及单抗浓度进行优化，对包被时间、一抗浓度及孵育时间、二抗浓度及孵育时间等条件优化；根据工作浓度将免疫抗原包被于ELISA孔中，同时以不同稀释倍数的样本血清与固定稀释倍数的单克隆抗体混合后进行阻断实验，将混合物与固相抗原结合作用，再以辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG为二抗继续孵育，用TMB显色液显色，加入2M硫酸溶液终止反应。本发明可有效移除传染源，消灭持久疫源地的存在，为新城疫的净化提供理论依据，具有检测灵敏、准确，操作简便及特异性强的优点。

公开(公告)号：CN110161246B

公开(公告)日：2020-08-11

申请号：CN201910449511.4

申请日：2019-05-28

Applicant: 吉林大学

Inventor： 丁壮 ,  林洪哲 ,  李金斗 ,  丁佳欣 ,  徐小洪 ,  钱晶 ,  尹仁福 ,  丁伟

IPC: G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  G01N33/543 ,  C07K16/10

Abstract: 区分新城疫病毒样颗粒疫苗免疫血清与野毒感染血清的间接竞争ELISA方法及试剂盒，属于病毒检测领域。本发明以NP蛋白为免疫抗原，以单克隆抗体为抗体诊断试剂，利用棋盘法对包被抗原及单抗浓度进行优化，对包被时间、一抗浓度及孵育时间、二抗浓度及孵育时间等条件优化；根据工作浓度将免疫抗原包被于ELISA孔中，同时以不同稀释倍数的样本血清与固定稀释倍数的单克隆抗体混合后进行阻断实验，将混合物与固相抗原结合作用，再以辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG为二抗继续孵育，用TMB显色液显色，加入2M硫酸溶液终止反应。本发明可有效移除传染源，消灭持久疫源地的存在，为新城疫的净化提供理论依据，具有检测灵敏、准确，操作简便及特异性强的优点。

公开(公告)号：CN114487386A

公开(公告)日：2022-05-13

申请号：CN202210072178.1

申请日：2022-01-21

Applicant: 吉林大学

Inventor： 徐小洪 ,  丁壮 ,  丁伟 ,  邹映雪 ,  黄天鸿 ,  曲书靚 ,  苏佳鑫 ,  刘婷婷

IPC: G01N33/543 ,  G01N33/535 ,  G01N33/68 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明属于禽类疾病检测技术领域，具体涉及一种禽源外泌体的ELISA检测方法专利申请。所述禽源外泌体的ELISA检测方法，包括样本制备、包被、封闭、加样、检测、结果判定等步骤。现有技术中，基于外泌体的ELISA检测方法均以人源外泌体表面标志蛋白CD9、CD81为靶标，但由于这些标志蛋白并不适用于禽用，也即，无法适用于检测禽源外泌体检测。为此，本申请以禽源外泌体表面标志蛋白CD63为标志物，通过制备禽源CD63蛋白、并制备其对应多抗血清，进一步以此为基础，设计开发了禽源外泌体的ELISA检测方法，进而可为禽类相关生理工作研究奠定一定技术基础。