公开(公告)号：CN101984062A

公开(公告)日：2011-03-09

申请号：CN201010182404.9

申请日：2010-05-26

Applicant: 吉林大学

Inventor： 欧阳红生 ,  唐小春 ,  逄大欣 ,  周杨 ,  朱建国 ,  赖良学 ,  陈月 ,  段新平 ,  张明军

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/12 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明涉及一种维持干细胞自我更新的6个猪源关键基因的体外转录质粒构建，其特征在于具体制备方法如下：首先设计基因体外转录空载体Vitro-TransPMD-18T，然后获得EGFP和维持干细胞自我更新的猪源的6个关键基因的cDNA，并按相应的酶切位点进行酶切连接，最后用体外转录试剂盒对7个体外转录质粒进行体外转录，得到相应的mRNA，然后将Vitro-Trans-EGFP转染进猪胚胎成纤维细胞：其6个基因体外转录出的mRNA转染进猪胚胎成纤维细胞后能够使其转变成猪的多能干细胞；6个基因体外转录出的mRNA能够高效翻译。

公开(公告)号：CN101892264A

公开(公告)日：2010-11-24

申请号：CN201010185038.2

申请日：2010-05-28

Applicant: 吉林大学

Inventor： 欧阳红生 ,  逄大欣 ,  段新平 ,  赖良学 ,  周杨 ,  周焱 ,  陈颖 ,  李占军 ,  欧阳松应 ,  赵增明 ,  朱建国

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/09 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877 ,  C12Q1/68 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明涉及一种肌生成抑制素MSTN基因敲除猪的建立，其特征在于具体制备方法如下：1、基因打靶载体的构建；2、MSTN基因敲除的猪胎儿成纤维细胞的构建；3、利用体细胞核移植技术构建MSTN基因敲除猪；4、对MSTN基因敲除猪的鉴定其应用基因敲除和转基因技术，可以获得高瘦肉率动物，构建MSTN基因敲除模型动物，为进一步研究该基因的功能具有重要意义。

公开(公告)号：CN101892257A

公开(公告)日：2010-11-24

申请号：CN201010185086.1

申请日：2010-05-28

Applicant: 吉林大学

Inventor： 逄大欣 ,  周杨 ,  欧阳红生 ,  朱建国 ,  张明军 ,  王铁东 ,  李莉 ,  聂代邦 ,  段新平 ,  毛丹

IPC: C12N15/63

Abstract: 本发明涉及一种表达猪源Cre重组酶载体pCEP4-Cre的构建，其特征在于：首先采用基因工程的方法构建pCEP4-Cre质粒，并用载体pCEP4-Cre与载体pEF-stop-eGFP共转染进入细胞，在表达Cre重组酶的情况下，将转入到细胞中的载体pEF-stop-eGFP中的Loxp卯定的终止子删除，使后接的报告基因eGFP得以表达，从而用于剪切条件性表达绿色荧光蛋白载体中的LoxP元件；其应用基因工程技术构建了一个表达Cre重组酶的质粒，并且重组质粒pCEP4-Cre可以在药物压力下独立于细胞染色体外存在，并在撤去药物压力后以每代10％的速率丢失；可有效的防止细胞基因组因插入外源基因而导致的基因突变；其使用的简便性和安全性可被广泛的应用，为人类Cre重组酶系统的检测发展起到积极的推动作用。

公开(公告)号：CN101984062B

公开(公告)日：2012-11-14

申请号：CN201010182404.9

申请日：2010-05-26

Applicant: 吉林大学

Inventor： 欧阳红生 ,  唐小春 ,  逄大欣 ,  周杨 ,  朱建国 ,  赖良学 ,  陈月 ,  段新平 ,  张明军

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/12 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明涉及一种维持干细胞自我更新的6个猪源关键基因的体外转录质粒构建，其特征在于具体制备方法如下：首先设计基因体外转录空载体Vitro-TransPMD-18T，然后获得EGFP和维持干细胞自我更新的猪源的6个关键基因的cDNA，并按相应的酶切位点进行酶切连接，最后用体外转录试剂盒对7个体外转录质粒进行体外转录，得到相应的mRNA，然后将Vitro-Trans-EGFP转染进猪胚胎成纤维细胞：其6个基因体外转录出的mRNA转染进猪胚胎成纤维细胞后能够使其转变成猪的多能干细胞；6个基因体外转录出的mRNA能够高效翻译。