公开(公告)号：CN104342482B

公开(公告)日：2016-06-15

申请号：CN201410530104.3

申请日：2014-10-10

Applicant: 哈尔滨工业大学

Inventor： 单毓娟 ,  张兰威 ,  李宝龙 ,  任明华 ,  宋微 ,  雷鹏 ,  何灿霞 ,  田思聪

IPC: C12Q1/34

Abstract: 本发明公开了一种益生菌中黑芥子酶活性检测方法。针对黑芥子酶可能是诱导酶的情况，使用黑芥子酶的反应底物黑芥子硫苷酸钾对菌体进行诱导，然后再测定黑芥子酶的活力。首先使用黑芥子硫苷酸钾代替葡萄糖进行初筛，初步判断菌株有无分解黑芥子硫苷酸钾的能力。再使用黑芥子硫苷酸钾诱导菌体产生黑芥子酶，使菌体产生黑芥子酶的代谢通路激活，然后将完整菌体加入到一定浓度黑芥子硫苷酸钾溶液中进行代谢，一定时间后离心去除菌体，测定上清液在340nm处的吸光度值，发现此时的吸光度值与不加入菌体的相同浓度的黑芥子硫苷酸钾溶液的吸光度值相比变化显著。因此，诱导菌体法测定益生菌中黑芥子酶活性的方法可行。该方法操作简单，检测周期短。

公开(公告)号：CN104293669A

公开(公告)日：2015-01-21

申请号：CN201410530160.7

申请日：2014-10-10

Applicant: 哈尔滨工业大学

Inventor： 单毓娟 ,  张兰威 ,  李宝龙 ,  任明华 ,  宋微 ,  雷鹏 ,  何灿霞 ,  田思聪

IPC: C12N1/04 ,  C12R1/23 ,  C12R1/245 ,  C12R1/25 ,  C12R1/225 ,  C12R1/01

CPC classification number: C12N1/04

Abstract: 本发明公开了一种高黑芥子酶活性益生菌菌株保藏方法，将高黑芥子酶活性益生菌菌株以2-5%接种量接种到50-100mLMRS液体培养基中37℃扩大培养24-48h，以使细菌生长进入稳定期，无菌的30-40%甘油与菌悬液各1mL加入灭菌的容量为3mL的离心管，塑料封口膜密封后放入-20℃冰箱保存0.5-1h后，立即放入冷冻罐中，使温度均匀下降，然后放入液氮罐中保存。本发明重点考虑到温度的骤然变化对菌体细胞的损伤影响，使菌体在面对低温保存环境下，能最大限度保护菌体细胞崩解而造成的酶活性降低。本方法操作简单，酶活性保持在高水平，而且花费少。

公开(公告)号：CN104342482A

公开(公告)日：2015-02-11

申请号：CN201410530104.3

申请日：2014-10-10

Applicant: 哈尔滨工业大学

Inventor： 单毓娟 ,  张兰威 ,  李宝龙 ,  任明华 ,  宋微 ,  雷鹏 ,  何灿霞 ,  田思聪

IPC: C12Q1/34

Abstract: 本发明公开了一种益生菌中黑芥子酶活性检测方法。针对黑芥子酶可能是诱导酶的情况，使用黑芥子酶的反应底物黑芥子硫苷酸钾对菌体进行诱导，然后再测定黑芥子酶的活力。首先使用黑芥子硫苷酸钾代替葡萄糖进行初筛，初步判断菌株有无分解黑芥子硫苷酸钾的能力。再使用黑芥子硫苷酸钾诱导菌体产生黑芥子酶，使菌体产生黑芥子酶的代谢通路激活，然后将完整菌体加入到一定浓度黑芥子硫苷酸钾溶液中进行代谢，一定时间后离心去除菌体，测定上清液在340nm处的吸光度值，发现此时的吸光度值与不加入菌体的相同浓度的黑芥子硫苷酸钾溶液的吸光度值相比变化显著。因此，诱导菌体法测定益生菌中黑芥子酶活性的方法可行。该方法操作简单，检测周期短。