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公开(公告)号：CN118497015B
公开(公告)日：2024-09-10
申请号：CN202410961323.0
申请日：2024-07-18
Applicant: 天津科技大学 , 惠农达生物技术(江苏)有限公司
Abstract: 本发明涉及微生物技术领域，公开了一种耐温红法夫酵母及其在生产虾青素中的应用，所述红法夫酵母为红法夫酵母TK1201；所述红法夫酵母TK1201已在2023年12月4日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.29217，微生物分类命名为红法夫酵母菌Phaffia rhodozyma。本发明的红法夫酵母能在发酵温度为16℃‑28℃下产生虾青素，克服了红法夫酵母低温生长的技术难题，获得能在相对较高温度生长且合成虾青素的红法夫酵母菌株及工艺。此外，本发明的红法夫酵母还可以产生β‑烟酰胺单核苷酸。
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公开(公告)号：CN116949020A
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202310686157.3
申请日：2023-06-09
Applicant: 天津科技大学
IPC: C12N9/54 , C12N15/57 , C12N15/75 , C12N1/21 , C11D3/386 , C11D1/22 , C11D1/29 , C11D1/37 , C12R1/125 , C12R1/07
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及通过易错PCR技术进行随机突变获得在两种阴表面活性剂中稳定性提高的碱性蛋白酶突变体及其应用。所述碱性蛋白酶突变体为G95P/A96D/S99W/S101T/P127S/S126T/N212S突变体，氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。在2％烷基苯磺酸AES存在情况下12h后的残余酶活达到85.9％，在2％烷基苯磺酸LAS存在情况下4h后的残余酶活达到61.2％。能够有效解决碱性蛋白酶在液体洗涤液中稳定性较低的问题。
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公开(公告)号：CN115927428A
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202211024636.0
申请日：2022-08-25
Applicant: 天津科技大学
Abstract: 本发明公开一种应用于简单节杆菌的基因快速编辑方法、遗传操作系统、菌株和应用，所述系统的构建方法包括如下步骤：使用基本的分子生物学技术手段扩增获得来自pCas9的cas9基因，并以pART2为载体，再经过对来自pTrc99a、pXMJ19质粒部分片段的引入修饰，获得CRISPR/Cas9质粒，并命名为pAS4，即为适用于简单节杆菌的CRISPR/Cas9遗传操作系统。本发明实现CRISPR/Cas系统在简单节杆菌中的有效应用，提高简单节杆菌的遗传可操作性，为更好探究简单节杆菌中与醋酸可的松代谢相关的基因或基因簇莫定理论基础。
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公开(公告)号：CN109852615B
公开(公告)日：2022-11-22
申请号：CN201910042397.3
申请日：2019-01-17
Applicant: 天津科技大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12R1/125
Abstract: 本发明涉及一种能够表达碱性蛋白酶的双向启动子，所述双向启动子的核苷酸序列为SEQ ID NO：1。本启动子来源于一种地衣芽孢杆菌基因组，通过转录组分析预测方法获得；在新型启动子pLA和其反向启动子pLB调控转录下，克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶表达活性达到164U/mL和111U/mL，正义链启动子比已知强组成型启动子pShuttle‑09的表达活性提高了44％；从而为枯草芽孢杆菌表达系统中异源基因的表达提供一个新的方向，并推动蛋白酶的高效表达及工业化。
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公开(公告)号：CN112239742B
公开(公告)日：2022-10-18
申请号：CN202010857565.7
申请日：2020-08-24
Applicant: 天津科技大学
Abstract: 发明属于基因工程领域，具体涉及一株生产碱性蛋白酶的地衣芽孢杆菌及其应用。所述菌株采用的宿主细胞是在地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)2709的基础上，通过敲除eps、pgs、sigF、chiAB、pulA、amyA、lchAC、upp基因，并删除9个基因组岛以实现宿主细胞的基因组精简来构建的。在经过改造的宿主菌种构建整合aprE表达盒，双拷贝的重组菌比宿主的酶活力提高37.45％，三拷贝的重组菌比双拷贝的重组菌酶活力提高9.36％。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112501149B
公开(公告)日：2022-03-18
申请号：CN202011513325.1
申请日：2020-12-21
Applicant: 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种碱性蛋白酶突变体及其基因、工程菌、制备方法和应用。本发明通过提取克劳氏芽孢杆菌基因组DNA，经PCR扩增得到野生型碱性蛋白酶基因序列，将扩增得到的野生型碱性蛋白酶基因通过易错PCR进行随机突变，通过高通量筛选后获得了若干个高活力碱性蛋白酶基因，再将这些高活力碱性蛋白酶基因进行DNA改组，通过筛选后获得八个更高活力的碱性蛋白酶突变体基因。将这八个突变体基因构建重组载体并在枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌中成功表达，得到产酶活力提高的重组菌株，进一步通过发酵工艺优化获得新型碱性蛋白酶。
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公开(公告)号：CN113930403A
公开(公告)日：2022-01-14
申请号：CN202111107673.3
申请日：2021-09-22
Applicant: 天津科技大学
Abstract: 本发明公开了一种地衣芽孢杆菌中胞外蛋白高表达的元件γ‑谷氨酰转肽酶，所述γ‑谷氨酰转肽酶的基因序列为：SEQ ID NO.3。本发明以一株B.licheniformis 2709为出发菌株，引入绿色荧光蛋白eGFP作为报告基因，对地衣芽孢杆菌进行突变菌株筛选，筛选出荧光强度高的菌株进行发酵培养。对突变菌株中的高产分泌蛋白进行分析研究，筛选出能够进行胞外蛋白高表达的元件。为后续其他基因在该系统中实现高效可控表达提供了参考依据。
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公开(公告)号：CN112080452A
公开(公告)日：2020-12-15
申请号：CN202010823789.6
申请日：2020-08-17
Applicant: 天津科技大学
Abstract: 本发明涉及一种高产苯乳酸地衣芽孢杆菌基因工程菌，所述基因工程菌的构建方法为：通过基因工程与代谢工程技术对地衣芽孢杆菌TCCC 11148(2709)或/大肠杆菌Rosetta(DE3)进行改造，包括抑制分支酸向色氨酸途径分支、抑制预苯酸向酪氨酸途径分支、过表达苯乳酸合成酶/氨基转移酶三步分子操作。本发明通过改造地衣芽孢杆菌芳香族氨基酸代谢途径，敲除苯乳酸合成前体苯丙氨酸合成途径竞争性酶基因，过表达苯乳酸合成最直接前体酶乳酸脱氢酶基因，大大提升苯乳酸产量，为获取目标产物苯乳酸提供了新的思路。最终，获得的苯乳酸生产菌株经发酵后产量达17.8g/L，在苯乳酸的工业化生产中具有一定潜力。
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公开(公告)号：CN111205354A
公开(公告)日：2020-05-29
申请号：CN202010074786.7
申请日：2020-01-22
Applicant: 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
Abstract: 本发明公开了一种提高异源蛋白分泌量的信号肽突变体及其构建方法与用途，属于基因工程技术领域。本发明中的信号肽突变体是将来源于革兰氏阳性菌Sec途径的信号肽N区的带电荷氨基酸进行定点突变，使N区氨基酸的电荷密度为0.2～0.8之间；对所述信号肽H区进行突变，使H区的氨基酸疏水性在0～70之间；对所述信号肽C区的氨基酸进行定点突变，使C区最后三位氨基酸突变为丙氨酸-任意氨基酸-丙氨酸。本发明可以有效提高异源蛋白在微生物宿主中的分泌量，有效推动了目的蛋白的高效表达及工业化生产。
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公开(公告)号：CN110305934A
公开(公告)日：2019-10-08
申请号：CN201910730740.3
申请日：2019-08-08
Applicant: 天津科技大学
Abstract: 本发明提供一种简便、快捷、高效测定蛋白酶活力的方法。该方法主要是利用一种寡肽化合物Suc-Ala-Ala-Pro-Tyr-pNA作为底物，配制该底物溶液与缓冲液、蛋白酶液组成的反应体系，蛋白酶水解该寡肽中酪氨酸(Tyr)与对硝基苯胺(pNA)之间的肽键，肽键断裂后产生的pNA单体在OD410处有吸收峰，反应后测定OD410的吸光值，可得蛋白酶的酶活力。本发明过程操作简单，耗时短，样品需求量小，并且可以同时进行多个样品的酶活测定工作，能够满足大批量样品测定工作的需求。
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