山羊乳腺上皮细胞的建系方法

    公开(公告)号:CN102660494A

    公开(公告)日:2012-09-12

    申请号:CN201210113304.X

    申请日:2012-04-17

    Abstract: 本发明公开了一种山羊乳腺上皮细胞建系方法。该方法在取材上选用了妊娠期山羊乳房组织;采用组织快法在普通细胞培养皿进行原代培养,将组织块干涸培养时间适当延长;干涸培养结束后立即添加适量乳腺上皮细胞培养液,后期半量换液,直至细胞铺满皿底;通过胰酶差速消化法纯化乳腺上皮细胞;使用高密度连续传代培养法建立起山羊乳腺上皮细胞系并冷冻保存。所述普通细胞培养皿未使用胶原覆盖;乳腺上皮细胞培养液中仅添了FBS、ITS、EGF。本发明具有简单、高效、低成本的建立山羊乳腺上皮细胞系的优点,为开展山羊乳腺发育、泌乳调控机制、乳腺生物反应器等研究提供大量极易获得的材料。

    一种生产转基因克隆猪的激活方法

    公开(公告)号:CN103060381A

    公开(公告)日:2013-04-24

    申请号:CN201310022662.4

    申请日:2013-01-22

    Abstract: 本发明公开了一种生产转基因克隆猪的激活方法,采用电激活与化学激活的联合激活,在采用电激活前,先用放线菌酮激活处理3min~25min。作为优选,放线菌酮激活的处理时间为10~20min;进一步优选,放线菌酮激活的处理时间为10min;放线菌酮激活处理的浓度为5~10μg/mL。本发明通过改变通常联合激活方式的顺序,采用先化学激活后电激活的方案,并缩短激活方案中化学辅助激活的时间,可以得到与原来先电激活后化学激活并较长时间的组合激活方案相似的胚胎发育能力,以及较低的囊胚凋亡率和囊胚阶段的DNA甲基化水平,将该方案生产的胚胎移植后成功生产转基因克隆猪。

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