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公开(公告)号：CN114934029B
公开(公告)日：2023-09-19
申请号：CN202210719336.8
申请日：2021-03-25
Applicant: 山东大学
IPC: C12N9/12 , C12N15/54 , C12Q1/6858
Abstract: 本发明提供一种Taq DNA聚合酶变体及其获得方法和在基因组编辑中的应用，属于生物技术领域。本发明的Taq DNA聚合酶变体是在野生型Taq DNA聚合酶基础上进行突变，并且所述Taq DNA聚合酶变体其突变氨基酸具体为：M4I,D371E,V518D,A798V。经试验证明，本发明筛选获得的高特异性Taq DNA聚合酶变体具有极佳的检测indels错配性能，可广泛应用于基因组编辑单细胞克隆基因分型、SNP基因分型等，表明其在基因组编辑测试和遗传变异检测等领域具有极大潜力，因此具有良好的实际应用之价值。
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公开(公告)号：CN114958799A
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202210719331.5
申请日：2021-03-25
Applicant: 山东大学
IPC: C12N9/12 , C12N15/54 , C12Q1/6858
Abstract: 本发明提供一种Taq DNA聚合酶变体及其在基因组编辑中的应用，属于生物技术领域。所述Taq DNA聚合酶变体在SEQ ID NO.1所示的野生型Taq DNA聚合酶基础上进行突变，并且所述Taq DNA聚合酶变体其突变氨基酸具体为：L441M。本发明通过对野生型全长Taq DNA聚合酶进行了半理性的定向分子进化来提高其特异性。经试验证明，采用本发明方法筛选获得的高特异性Taq DNA聚合酶变体在CRISPR/Cas9编辑效率评估和单细胞克隆基因分型中展现出了极大的优势。此外，该变体在检测自然发生的遗传变异如SNP也具有优良的性能，因此具有良好的实际应用之价值。
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公开(公告)号：CN114934029A
公开(公告)日：2022-08-23
申请号：CN202210719336.8
申请日：2021-03-25
Applicant: 山东大学
IPC: C12N9/12 , C12N15/54 , C12Q1/6858
Abstract: 本发明提供一种Taq DNA聚合酶变体及其获得方法和在基因组编辑中的应用，属于生物技术领域。本发明的Taq DNA聚合酶变体是在野生型Taq DNA聚合酶基础上进行突变，并且所述Taq DNA聚合酶变体其突变氨基酸具体为：M4I,D371E,V518D,A798V。经试验证明，本发明筛选获得的高特异性Taq DNA聚合酶变体具有极佳的检测indels错配性能，可广泛应用于基因组编辑单细胞克隆基因分型、SNP基因分型等，表明其在基因组编辑测试和遗传变异检测等领域具有极大潜力，因此具有良好的实际应用之价值。
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公开(公告)号：CN115161302B
公开(公告)日：2023-08-29
申请号：CN202210720396.1
申请日：2021-03-25
Applicant: 山东大学
IPC: C12N9/12 , C12Q1/6858
Abstract: 本发明提供一种高特异性Taq DNA聚合酶变体及其获得方法和应用，属于生物技术领域。本发明基于高特异性Taq DNA聚合酶定向进化策略，对野生型全长Taq DNA聚合酶进行了半理性的定向分子进化来提高其特异性，针对基因组编辑indel导致的引物/模板错配，通过广泛的定向进化来获得性能更好的Taq聚合酶变体。经试验证明，本发明筛选获得的Taq DNA聚合酶变体显著提高了getPCR方法对单细胞克隆基因分型的准确性，同时也使AS‑qPCR SNP基因分型成为更可行的方法，因此具有良好的实际应用之价值。
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公开(公告)号：CN114934030B
公开(公告)日：2023-08-18
申请号：CN202210720401.9
申请日：2021-03-25
Applicant: 山东大学
IPC: C12N9/12 , C12N15/54 , C12Q1/6858
Abstract: 本发明提供高特异性Taq DNA聚合酶变体及其在基因组编辑和/或基因突变检测应用，属于生物技术领域。本发明基于一种高特异性Taq定向进化策略，针对基因组编辑indel导致的引物/模板错配，通过广泛的定向进化来获得性能更好的Taq聚合酶变体。此外，作为起始分子，我们使用了全长Taq聚合酶而不是其他研究中常用的Klenow片段，使得筛选获得的高特异性Taq DNA聚合酶变体不仅适用于基于SYBR Green的qPCR，也适用于基于TaqMan探针的qPCR应用，因此具有良好的实际应用之价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN115161301A
公开(公告)日：2022-10-11
申请号：CN202210719339.1
申请日：2021-03-25
Applicant: 山东大学
IPC: C12N9/12 , C12N15/54 , C12Q1/6827
Abstract: 本发明提供一种高特异性Taq DNA聚合酶变体及其应用，属于生物技术领域。本发明通过对野生型全长Taq DNA聚合酶进行了半理性的定向分子进化来提高其特异性。选取Taq酶上与引物/模板复合物有直接相互作用的全部极性氨基酸进行逐个突变，然后在这些变体及野生型序列的基础上进行广泛的随机诱变，生成Taq突变体文库，最终筛选出一系列具有高特异性的Taq突变体，在CRISPR/Cas9编辑效率评估和单细胞克隆基因分型中展现出了极大的优势，具有良好的实际应用之价值。
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公开(公告)号：CN112921015A
公开(公告)日：2021-06-08
申请号：CN202110320668.4
申请日：2021-03-25
Applicant: 山东大学
IPC: C12N9/12 , C12N15/54 , C12Q1/6858
Abstract: 本发明提供高特异性Taq DNA聚合酶变体及其在基因组编辑和基因突变检测中的应用，属于生物技术领域。本发明通过对野生型全长Taq DNA聚合酶进行了半理性的定向分子进化来提高其特异性。选取Taq酶上与引物/模板复合物有直接相互作用的全部极性氨基酸进行逐个突变，获得40个Taq变体，然后在这些变体及野生型序列的基础上进行广泛的随机诱变，生成Taq突变体文库。在我们的qPCR筛选系统上，以基因组编辑indels质粒为模板，筛选出一系列具有高特异性的Taq突变体，在CRISPR/Cas9编辑效率评估和单细胞克隆基因分型中展现出了极大的优势，因此具有良好的实际应用之价值。
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公开(公告)号：CN115161301B
公开(公告)日：2023-11-03
申请号：CN202210719339.1
申请日：2021-03-25
Applicant: 山东大学
IPC: C12N9/12 , C12N15/54 , C12Q1/6827
Abstract: 本发明提供一种高特异性Taq DNA聚合酶变体及其应用，属于生物技术领域。本发明通过对野生型全长Taq DNA聚合酶进行了半理性的定向分子进化来提高其特异性。选取Taq酶上与引物/模板复合物有直接相互作用的全部极性氨基酸进行逐个突变，然后在这些变体及野生型序列的基础上进行广泛的随机诱变，生成Taq突变体文库，最终筛选出一系列具有高特异性的Taq突变体，在CRISPR/Cas9编辑效率评估和单细胞克隆基因分型中展现出了极大的优势，具有良好的实际应用之价值。
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公开(公告)号：CN114958799B
公开(公告)日：2023-08-18
申请号：CN202210719331.5
申请日：2021-03-25
Applicant: 山东大学
IPC: C12N9/12 , C12N15/54 , C12Q1/6858
Abstract: 本发明提供一种Taq DNA聚合酶变体及其在基因组编辑中的应用，属于生物技术领域。所述Taq DNA聚合酶变体在SEQ ID NO.1所示的野生型Taq DNA聚合酶基础上进行突变，并且所述Taq DNA聚合酶变体其突变氨基酸具体为：L441M。本发明通过对野生型全长Taq DNA聚合酶进行了半理性的定向分子进化来提高其特异性。经试验证明，采用本发明方法筛选获得的高特异性Taq DNA聚合酶变体在CRISPR/Cas9编辑效率评估和单细胞克隆基因分型中展现出了极大的优势。此外，该变体在检测自然发生的遗传变异如SNP也具有优良的性能，因此具有良好的实际应用之价值。
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公开(公告)号：CN115161302A
公开(公告)日：2022-10-11
申请号：CN202210720396.1
申请日：2021-03-25
Applicant: 山东大学
IPC: C12N9/12 , C12Q1/6858
Abstract: 本发明提供一种高特异性Taq DNA聚合酶变体及其获得方法和应用，属于生物技术领域。本发明基于高特异性Taq DNA聚合酶定向进化策略，对野生型全长Taq DNA聚合酶进行了半理性的定向分子进化来提高其特异性，针对基因组编辑indel导致的引物/模板错配，通过广泛的定向进化来获得性能更好的Taq聚合酶变体。经试验证明，本发明筛选获得的Taq DNA聚合酶变体显著提高了getPCR方法对单细胞克隆基因分型的准确性，同时也使AS‑qPCR SNP基因分型成为更可行的方法，因此具有良好的实际应用之价值。
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