一种利用鸡全基因组CRISPR高通量技术筛选呕吐毒素抗性基因的方法

    公开(公告)号:CN118389599B

    公开(公告)日:2024-10-18

    申请号:CN202410832652.5

    申请日:2024-06-26

    Abstract: 本发明公开了一种利用鸡全基因组CRISPR高通量技术筛选呕吐毒素抗性基因的方法。属于动物育种技术领域。本发明先获得了稳定表达Cas9蛋白的DF‑1细胞系。随后构建鸡全基因组sgRNA文库质粒并将其包装成慢病毒感染DF‑1‑Cas9细胞系,利用流式细胞术获得敲除细胞库。以呕吐毒素为模型攻毒敲除细胞库,收集存活细胞并扩大培养,提取细胞基因组信息进行高通量测序,再使用MAGeCK软件进行差异分析,最后构建单基因敲除细胞系验证抗性基因。本发明构建了鸡全基因组敲除文库筛选技术,成功筛选到呕吐毒素抗性基因,对禽细胞建立全基因组CRISPR敲除细胞库的流程提供参考意义,为鸡功能基因的高通量筛选奠定基础。

    一种利用鸡全基因组CRISPR高通量技术筛选呕吐毒素抗性基因的方法

    公开(公告)号:CN118389599A

    公开(公告)日:2024-07-26

    申请号:CN202410832652.5

    申请日:2024-06-26

    Abstract: 本发明公开了一种利用鸡全基因组CRISPR高通量技术筛选呕吐毒素抗性基因的方法。属于动物育种技术领域。本发明先获得了稳定表达Cas9蛋白的DF‑1细胞系。随后构建鸡全基因组sgRNA文库质粒并将其包装成慢病毒感染DF‑1‑Cas9细胞系,利用流式细胞术获得敲除细胞库。以呕吐毒素为模型攻毒敲除细胞库,收集存活细胞并扩大培养,提取细胞基因组信息进行高通量测序,再使用MAGeCK软件进行差异分析,最后构建单基因敲除细胞系验证抗性基因。本发明构建了鸡全基因组敲除文库筛选技术,成功筛选到呕吐毒素抗性基因,对禽细胞建立全基因组CRISPR敲除细胞库的流程提供参考意义,为鸡功能基因的高通量筛选奠定基础。

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