-
公开(公告)号：CN107904257A
公开(公告)日：2018-04-13
申请号：CN201711247666.7
申请日：2017-11-22
Applicant: 上海药明生物技术有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司
CPC classification number: C12N15/85 , C12N9/0006 , C12N9/12 , C12N2800/107 , C12Y207/11002
Abstract: 本发明公开一种增加CHO细胞群蛋白表达量的方法，其利用shRNA技术控制乳酸代谢通路上关键酶的转录，具体步骤包括：1)构建含有待表达蛋白序列的质粒和含有表达乳酸代谢通路上关键酶的shRNA的质粒；2)将步骤1)中构建的质粒通过转染的方法引入CHO细胞中；3)对步骤2)中转染后细胞进行抗生素筛选；4)待细胞状态恢复后，采用步骤3)筛选后的细胞生产目标蛋白；所述表达乳酸代谢通路上关键酶包括乳酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶激酶。本发明所提供的方法与传统CHO细胞群生产中需要对pH进行密切监测并不断通过加入碱来调节相比，此发明仅仅在转染时同时额外共同转染数个shRNA质粒，不但操作复杂程度大幅降低，而且对乳酸降低进而最终蛋白产量提高有较大的保障。
-
公开(公告)号：CN106755096A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201611183175.6
申请日：2016-12-20
Applicant: 上海药明生物技术有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司
CPC classification number: C12N15/85 , C12N15/65 , C12N2800/107 , C12N2800/90
Abstract: 本发明公开一种利用piggyBac转座子在CHO细胞中获得表达目标蛋白的稳定细胞群的方法，步骤包括：1)构建含有待表达的编码目标蛋白基因和抗生素筛选基因的基因片段的质粒，和含有piggyBac转座子序列的质粒；2)将步骤1)中构建的质粒转染同时引入CHO细胞中；3)对步骤2)中转染后细胞直接在摇瓶中进行抗生素筛选。本方法能够在一到两周时间内构建稳定的细胞群，并能够高效的表达目标蛋白。以及，本发明还公开一种利用piggyBac转座子在CHO细胞中获得表达目标蛋白的稳定细胞群并直接放大生产目标蛋白的方法，可满足50升以上的生产。
-
公开(公告)号：CN107699608A
公开(公告)日：2018-02-16
申请号：CN201711170830.9
申请日：2017-11-22
Applicant: 上海药明生物技术有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司
IPC: C12Q1/6841
CPC classification number: C12Q1/6841 , C12Q2565/518 , C12Q2563/107
Abstract: 本发明公开一种利用染色体原位荧光杂交检验CHO外源基因插入位点的方法，包括步骤：1)探针制备：通过切口平移的方法处理构建有插入基因片段的载体，获得带有荧光基团的DNA探针；2)染色体铺展：将CHO细胞加入秋水仙胺后进行固定及涂片；3)探针杂交：将步骤1)中制备的DNA探针和步骤2)经过处理的样品涂片进行杂交；4)显微镜观察荧光的分布。本发明结合了细胞学和染色体组学，通过荧光蛋白标记的探针，可以在荧光显微镜下直观地看到插入位点分布在哪一(几)条染色体的什么位置，从而对细胞株的单克隆性进行判断。通过FISH技术可以在一个星期内完成对细胞系单克隆性的检测，并且通量也比插入序列分析有了大幅提高。
-
Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108034632A
公开(公告)日：2018-05-15
申请号：CN201711281781.6
申请日：2017-12-07
Applicant: 上海药明生物技术有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司
IPC: C12N5/071
CPC classification number: C12N5/0602 , C12N2509/10
Abstract: 本发明公开一种利用流式细胞仪进行细胞单克隆化的方法，包括：步骤一、细胞分选：使用清洁后的流式细胞仪进行细胞分选，利用FSC和SSC的信号进行细胞粘连体去除，孔板中每孔分选1个目标细胞。步骤三、细胞培养：将分选后的目标细胞在二氧化碳培养箱静置培养，培养条件为36.5℃和5～6％CO2，培养5～15天，待克隆恢复。采用本发明的方法，单克隆率达到99.5％。
-
公开(公告)号：CN106987559A
公开(公告)日：2017-07-28
申请号：CN201710172903.1
申请日：2017-03-22
Applicant: 上海药明生物技术有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司 , 苏州药明康德检测检验有限责任公司
CPC classification number: C07K14/005 , C12N15/85 , C12N2510/00 , C12N2710/16222 , C12N2800/22 , C12N2820/60
Abstract: 本发明公开一种能够稳定表达截短型EBNA1蛋白的重组CHOK1细胞株的构建方法，包括以下步骤：(1)EBNA1t表达载体的构建，将如SEQ ID NO:1所示序列克隆至pWX1.0和pWX2.0载体中；(2)转染与细胞群筛选；(3)有限稀释法克隆，挑选单克隆细胞株。本发明还公开上述方法获得的重组CHOK1‑EBNA1t细胞株用于重组蛋白瞬时表达的应用，包括以下步骤：(1)构建重组蛋白瞬时表达载体；(2)转染前进行细胞传代培养；(3)转染与细胞培养工艺，使用PEI将步骤(1)得到的重组蛋白瞬时表达载体转染步骤(2)传代培养获得的CHOK1‑EBNA1t细胞株；(4)评估重组蛋白的表达量。本发明的重组CHOK1‑EBNA1t细胞株用于重组蛋白瞬时表达，不仅表达量高，一般为100‑300mg/L，而且工艺简便，既适用于大体积生产，也适用于小体积高通量筛选。
-
公开(公告)号：CN106399360A
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201510447211.4
申请日：2015-07-27
Applicant: 上海药明生物技术有限公司 , 无锡药明康德生物技术股份有限公司
IPC: C12N15/85
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR技术敲除FUT8基因的方法，步骤包括：1)设计sgRNA序列；2)将sgRNA序列重组至第一载体中，得第二载体；3)将第二载体转染至细胞中，抽提DNA；4)PCR扩增；5)PCR产物变性、退火，形成异源杂交双链；6)切割异源杂交双链并分析产物，得各细胞群发生NHEJ的比例；7)挑选NHEJ比例高的细胞群进行有限稀释法克隆，筛选单克隆细胞扩大培养，获得FUT8基因敲除抗体。本发明还公开了用于上述方法的sgRNA序列。本发明通过编码能识别FUT8基因特定序列的sgRNA，将其与编码核酸内切酶的序列转染进细胞中，实现了让FUT8基因失活的目的，提高了抗体ADCC活性。
-
公开(公告)号：CN105368957A
公开(公告)日：2016-03-02
申请号：CN201510927246.8
申请日：2015-12-14
Applicant: 无锡药明康德生物技术股份有限公司 , 上海药明生物技术有限公司 , 天津药明康德新药开发有限公司
CPC classification number: C12Q1/6851 , C12Q2545/113 , C12Q2537/143 , C12Q2563/159 , C12Q2521/301
Abstract: 本发明公开了一种CHO细胞基因拷贝数的微滴数字PCR定量检测方法，步骤包括：1)提取CHO细胞基因组DNA；2)用限制性内切酶对基因组DNA进行酶切处理；3)进行微滴数字PCR反应；4)PCR反应结束后，测定PCR反应板每孔样品的阳性微滴、阴性微滴数目，获得CHO细胞的基因拷贝数。本发明还公开了用于上述方法的引物和探针。本发明通过选择合适的参照基因、设计合适的引物和荧光标记探针、优化CHO细胞基因组模板上样量、选择合适的限制性内切酶对基因组模板进行酶切处理、评估不同的基因组提取试剂盒对ddPCR检测结果的影响，提高了CHO细胞基因拷贝数的微滴数字PCR绝对定量检测的灵敏度和精确度。
-
公开(公告)号：CN103320388B
公开(公告)日：2015-10-28
申请号：CN201210074420.5
申请日：2012-03-20
Applicant: 无锡药明康德生物技术股份有限公司
IPC: C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种提高抗体表达量和改良糖基化水平的细胞培养方法，包括：通过优化的表达抗体的细胞株的基础培养基和补料批次方法，进行表达抗体的细胞株的培养；其中，优化的基础培养基，包括：基础培养基和驯化培养基的混合物；所述基础培养基包括：CDOptiCHO基础培养基；驯化培养基包括：CD FortiCHO、多宁S3、多宁S4培养基；优化的补料批次方法包括：先加入多宁AR7和多宁BR7后，再加入Cell Boost 2和Cell Boost 5。本发明能在提高抗体表达量的同时优化目的抗体的糖基化含量，从而改进抗体药物的活性和药效，适用于抗体仿制药和抗体新药的开发和产业化。
-
-
-
-
-
-
-
Search Results
8
records
(took 0.037 seconds)
