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公开(公告)号：CN112961850A
公开(公告)日：2021-06-15
申请号：CN202110160901.7
申请日：2021-02-05
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效分泌表达几丁二糖脱乙酰酶的枯草芽孢杆菌及其应用，本发明通过对几丁二糖脱乙酰酶Dac的分子结构及表达载体pP43mut‑N1‑yncM‑Dac的RBS序列进行改造，提高几丁二糖脱乙酰酶Dac的催化速率及翻译表达速率，提高酶活，并构建了可以高产氨基葡萄糖GlcN的枯草芽孢杆菌。与现有技术相比，几丁二糖脱乙酰酶胞外酶活可达3769.5U/mL。本转化方法条件温和，对环境污染小，而且底物选择性高，目标产物专一，反应速率快，产物得率高。此法有利于解决化学合成法中污染严重，步骤繁琐等问题，而且工艺简单，易于控制，方便推广应用。
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公开(公告)号：CN115960874B
公开(公告)日：2024-09-20
申请号：CN202310111425.9
申请日：2023-02-14
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌内源GlcNAc6P磷酸酶及提高GlcNAc产量的方法，具体涉及采用重组谷氨酸棒杆菌进行发酵生产，该重组谷氨酸棒杆菌过表达了如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，该蛋白编码GlcNAc6P磷酸酶，能将GlcNAc6P去磷酸化为GlcNAc。本发明通过机器学习的方式鉴定了谷氨酸棒杆菌内源GlcNAc胞内转运蛋白以及内源GlcNAc6P磷酸酶的编码基因，并根据筛选结果对菌株进行改造，显著提高了GlcNAc的产量。
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公开(公告)号：CN114574410B
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202210116458.8
申请日：2022-02-07
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种高效生产N‑乙酰氨基葡萄糖的大肠杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明所述重组大肠杆菌以大肠杆菌E.coli ATCC25947(DE3)为出发菌株，过表达具有若干个T7lac启动子控制的gna1基因与具有若干个T7lac启动子控制的glmS基因，并敲除manX基因、manY基因、manZ基因、nagA基因、nagB基因、nagE基因、poxB基因和ldhA基因所得，提高了N‑乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量，其浓度最高可达180g/L，葡萄糖转化率56％，不产生乙酸和乳酸副产物，为进一步代谢工程改造大肠杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114591881B
公开(公告)日：2023-07-21
申请号：CN202210265171.1
申请日：2022-03-17
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种分泌几丁二糖脱乙酰酶的枯草芽孢杆菌及其应用，通过对几丁二糖脱乙酰酶Dac的表达载体pP43NMK‑D65的启动子及RBS序列进行改造，平衡菌株的生长和产物的生产，提高酶活；再通过过表达细胞壁合成蛋白EzrA，修复几丁二糖脱乙酰酶Dac在表达过程中对细胞壁的损害，实现几丁二糖脱乙酰酶Dac诱导后在发酵液中的持续性表达。与现有技术相比，本发明提供的菌株构建完成后生产性能稳定，几丁二糖脱乙酰酶胞外酶活可达6404.83U/mL，具有很好的应用前景，为酶转化法实现GlcN的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN117645985A
公开(公告)日：2024-03-05
申请号：CN202311593867.8
申请日：2023-11-27
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种乙酰氨基葡萄糖‑6磷酸磷酸酶突变体及其应用，属于生物技术领域。本发明以来源于多形拟杆菌Bacteroides thetaiotaomicron VPI‑5482的乙酰氨基葡萄糖‑6磷酸磷酸酶为出发序列，通过突变位点的筛选及验证，发现了一种能够提高此酶的底物专一性和催化活力的突变体，将该突变体引入基因工程大肠杆菌中后进行发酵验证，发现N‑乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量最高可达224g/L，与转化突变前pET28a‑BT4131的对照菌株相比，发酵液中乙酰氨基葡萄糖浓度提高了49.3％，在工业生产上具有十分广阔的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114574410A
公开(公告)日：2022-06-03
申请号：CN202210116458.8
申请日：2022-02-07
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种高效生产N‑乙酰氨基葡萄糖的大肠杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明所述重组大肠杆菌以大肠杆菌E.coli ATCC25947(DE3)为出发菌株，过表达具有若干个T7lac启动子控制的gna1基因与具有若干个T7lac启动子控制的glmS基因，并敲除manX基因、manY基因、manZ基因、nagA基因、nagB基因、nagE基因、poxB基因和ldhA基因所得，提高了N‑乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量，其浓度最高可达180g/L，葡萄糖转化率56％，不产生乙酸和乳酸副产物，为进一步代谢工程改造大肠杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113293155A
公开(公告)日：2021-08-24
申请号：CN202110603957.5
申请日：2021-05-31
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种几丁二糖脱乙酰酶突变体，由极端嗜热古菌Pyrococcus horikoshii的几丁二糖脱乙酰酶的第74位的甘氨酸G突变为丙氨酸A得到。本发明提高了几丁二糖脱乙酰酶Dac的酶活、表达量和催化效率，解决了几丁二糖脱乙酰酶Dac转化合成氨基葡萄糖GlcN效率不高的问题。
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公开(公告)号：CN115960874A
公开(公告)日：2023-04-14
申请号：CN202310111425.9
申请日：2023-02-14
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌内源GlcNAc6P磷酸酶及提高GlcNAc产量的方法，具体涉及采用重组谷氨酸棒杆菌进行发酵生产，该重组谷氨酸棒杆菌过表达了如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，该蛋白编码GlcNAc6P磷酸酶，能将GlcNAc6P去磷酸化为GlcNAc。本发明通过机器学习的方式鉴定了谷氨酸棒杆菌内源GlcNAc胞内转运蛋白以及内源GlcNAc6P磷酸酶的编码基因，并根据筛选结果对菌株进行改造，显著提高了GlcNAc的产量。
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公开(公告)号：CN114591881A
公开(公告)日：2022-06-07
申请号：CN202210265171.1
申请日：2022-03-17
Applicant: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种分泌几丁二糖脱乙酰酶的枯草芽孢杆菌及其应用，通过对几丁二糖脱乙酰酶Dac的表达载体pP43NMK‑D65的启动子及RBS序列进行改造，平衡菌株的生长和产物的生产，提高酶活；再通过过表达细胞壁合成蛋白EzrA，修复几丁二糖脱乙酰酶Dac在表达过程中对细胞壁的损害，实现几丁二糖脱乙酰酶Dac诱导后在发酵液中的持续性表达。与现有技术相比，本发明提供的菌株构建完成后生产性能稳定，几丁二糖脱乙酰酶胞外酶活可达6404.83U/mL，具有很好的应用前景，为酶转化法实现GlcN的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113355310A
公开(公告)日：2021-09-07
申请号：CN202110601441.7
申请日：2021-05-31
Applicant: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
Abstract: 本发明涉及一种最适pH降低的几丁二糖脱乙酰酶组合突变体，通过分子模型和计算机分析预测几丁二糖脱乙酰酶表面电荷及酶活相关位点，再通过定点突变技术构建相关位点的突变体，筛选出不同位点突变时最适pH、酶活以及产物GlcN稳定性均较优的单突变体，构建其组合突变体，得到最适pH下降至6.0，酶活明显提高的组合突变体。
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