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公开(公告)号：CN113150120A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110558529.5
申请日：2021-05-21
Applicant: 江南大学 , 江苏东汇生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了发酵液中猪肌红蛋白的分离纯化方法，属于生物技术领域。本发明通过在发酵液中创造性地分步添加不同浓度的硫酸铵，对表达猪肌红蛋白的重组毕赤酵母的发酵液进行浓缩，并对其进一步超滤浓缩，并对浓缩液进行纯化得到的肌红蛋白纯度达88.04％，纯化率可达66.05％，实现了从发酵液中纯化猪肌红蛋白，解决了之前猪肌红蛋白发酵液难以纯化的问题，并实现了猪肌红蛋白发酵液的高效纯化。本发明的分离纯化方法特异性高，操作条件温和，步骤简洁，纯化效果好，回收率高，成本低，速度快，益于扩大生产。
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公开(公告)号：CN113265346A
公开(公告)日：2021-08-17
申请号：CN202110560189.X
申请日：2021-05-21
Applicant: 江南大学 , 江苏东汇生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种发酵生产猪肌红蛋白的基因工程菌及其应用，属于基因工程技术领域。本发明通过在毕赤酵母中整合了猪肌红蛋白的基因，实现了猪肌红蛋白的高效分泌与表达。对启动子和信号肽分别进行了优化，所得基因工程菌株在摇瓶水平可以实现46.15mg/L肌红蛋白的合成，为工业化生产猪肌红蛋白提供了广阔前景。
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公开(公告)号：CN113186147B
公开(公告)日：2023-06-06
申请号：CN202110561197.6
申请日：2021-05-21
Applicant: 江南大学 , 江苏东汇生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种提高毕赤酵母工程菌生产猪肌红蛋白的发酵方法，属于生物工程技术领域。本发明是以产猪肌红蛋白毕赤酵母工程Pichia pastoris X33‑GAP‑Mb为出发菌株，在摇瓶水平进行培养基和培养条件的初步优化。以Pichia pastoris X33‑GAP‑Mb、Pichia pastorisX33‑G1‑Mb为出发菌株，在发酵罐水平进行发酵条件优化，发现DO为30％，血红素流加浓度为150mg/L时，可显著提升猪肌红蛋白的产量，达到285.42mg/L。本发明中猪肌红蛋白的生物制造具有污染少、产品质量高等优点，具有发展前景，这对于猪肌红蛋白的工业化生产具有重要的应用意义。
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公开(公告)号：CN112553177A
公开(公告)日：2021-03-26
申请号：CN202011586610.6
申请日：2020-12-29
Applicant: 江南大学 , 江苏东汇生物科技有限公司
IPC: C12N9/10 , C12N15/54 , C12N15/70 , C12N1/21 , A23C9/12 , A23C19/032 , A23C19/06 , A23G9/36 , A23L11/00 , A23L13/40 , A23L13/60 , A23L13/70 , A23L17/00 , A23L27/60 , A23L29/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的谷氨酰胺转氨酶变体，属于生物领域和食品领域。本发明的谷氨酰胺转氨酶变体为热稳定性改善的酶，包含对应于SEQ ID NO.1所示序列谷氨酰胺转氨酶第1‑45位的酶原区替换，以及成熟区序列的第189和287位的取代。本发明的谷氨酰胺转氨酶变体可以在食品处理、加工和转化等方面进行应用，可以用于保持或改善食品的品质、稠度、弹性、水分或粘度。热稳定性改善的谷氨酰胺转氨酶变体更利于其在严苛的工业环境中稳定应用，如人造肉肉糜加工及肉丸加工。
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公开(公告)号：CN113150120B
公开(公告)日：2022-09-30
申请号：CN202110558529.5
申请日：2021-05-21
Applicant: 江南大学 , 江苏东汇生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了发酵液中猪肌红蛋白的分离纯化方法，属于生物技术领域。本发明通过在发酵液中创造性地分步添加不同浓度的硫酸铵，对表达猪肌红蛋白的重组毕赤酵母的发酵液进行浓缩，并对其进一步超滤浓缩，并对浓缩液进行纯化得到的肌红蛋白纯度达88.04％，纯化率可达66.05％，实现了从发酵液中纯化猪肌红蛋白，解决了之前猪肌红蛋白发酵液难以纯化的问题，并实现了猪肌红蛋白发酵液的高效纯化。本发明的分离纯化方法特异性高，操作条件温和，步骤简洁，纯化效果好，回收率高，成本低，速度快，益于扩大生产。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112553177B
公开(公告)日：2022-04-01
申请号：CN202011586610.6
申请日：2020-12-29
Applicant: 江南大学 , 江苏东汇生物科技有限公司
IPC: C12N9/10 , C12N15/54 , C12N15/70 , C12N1/21 , A23C9/12 , A23C19/032 , A23C19/06 , A23G9/36 , A23L11/00 , A23L13/40 , A23L13/60 , A23L13/70 , A23L17/00 , A23L27/60 , A23L29/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的谷氨酰胺转氨酶变体，属于生物领域和食品领域。本发明的谷氨酰胺转氨酶变体为热稳定性改善的酶，包含对应于SEQ ID NO.1所示序列谷氨酰胺转氨酶第1‑45位的酶原区替换，以及成熟区序列的第189和287位的取代。本发明的谷氨酰胺转氨酶变体可以在食品处理、加工和转化等方面进行应用，可以用于保持或改善食品的品质、稠度、弹性、水分或粘度。热稳定性改善的谷氨酰胺转氨酶变体更利于其在严苛的工业环境中稳定应用，如人造肉肉糜加工及肉丸加工。
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公开(公告)号：CN113265346B
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202110560189.X
申请日：2021-05-21
Applicant: 江南大学 , 江苏东汇生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种发酵生产猪肌红蛋白的基因工程菌及其应用，属于基因工程技术领域。本发明通过在毕赤酵母中整合了猪肌红蛋白的基因，实现了猪肌红蛋白的高效分泌与表达。对启动子和信号肽分别进行了优化，所得基因工程菌株在摇瓶水平可以实现46.15mg/L肌红蛋白的合成，为工业化生产猪肌红蛋白提供了广阔前景。
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公开(公告)号：CN113186147A
公开(公告)日：2021-07-30
申请号：CN202110561197.6
申请日：2021-05-21
Applicant: 江南大学 , 江苏东汇生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种提高毕赤酵母工程菌生产猪肌红蛋白的发酵方法，属于生物工程技术领域。本发明是以产猪肌红蛋白毕赤酵母工程Pichia pastoris X33‑GAP‑Mb为出发菌株，在摇瓶水平进行培养基和培养条件的初步优化。以Pichia pastoris X33‑GAP‑Mb、Pichia pastorisX33‑G1‑Mb为出发菌株，在发酵罐水平进行发酵条件优化，发现DO为30％，血红素流加浓度为150mg/L时，可显著提升猪肌红蛋白的产量，达到285.42mg/L。本发明中猪肌红蛋白的生物制造具有污染少、产品质量高等优点，具有发展前景，这对于猪肌红蛋白的工业化生产具有重要的应用意义。
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公开(公告)号：CN113005071B
公开(公告)日：2022-06-28
申请号：CN202110250694.4
申请日：2021-03-08
Applicant: 上海交通大学 , 江苏东汇生物科技有限公司 , 泰兴市东圣生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种SsgA编码基因SMDS_1018的用途、重组菌株及其构建方法。本发明通过增强SsgA编码基因的转录水平，促进菌丝横隔形成、提高谷氨酰胺转氨酶酶原的分泌效率，进而提升谷氨酰胺转氨酶产量。通过在茂源链霉菌中，利用人工强启动子kasOp*过量表达内源SsgA编码基因SMDS_1018，得到高产谷氨酰胺转氨酶的重组菌株WD07。增强SsgA编码基因的转录水平使菌丝横隔增多，提高了谷氨酰胺转氨酶酶原的分泌，最终可明显提高谷氨酰胺转氨酶产量。所得的重组菌株WD07的谷氨酰胺转氨酶发酵终产量在实验室摇瓶水平下较对照菌株提高35％。
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公开(公告)号：CN112961845B
公开(公告)日：2022-06-28
申请号：CN202110250695.9
申请日：2021-03-08
Applicant: 上海交通大学 , 江苏东汇生物科技有限公司 , 泰兴市东圣生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9技术敲除cslA基因以提高谷氨酰胺转氨酶发酵水平的方法，是通过CRISPR/Cas9技术敲除茂源链霉菌DSM D40587基因组中CslA编码基因SMDS_4125，得到谷氨酰胺转氨酶产量提高的突变株。缺失CslA编码基因使得菌丝球变得小而疏松，提高了谷氨酰胺转氨酶酶原的分泌效率，由此来提高谷氨酰胺转氨酶产量。本发明所得的工程菌株的谷氨酰胺转氨酶发酵终产量较野生菌株提高了2.5倍。通过本发明可显著提高谷氨酰胺转氨酶的发酵产量，同时使发酵成本大幅降低。
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