FIPV基因过量表达的转基因拟南芥株系及其构建方法

    公开(公告)号:CN110295174A

    公开(公告)日:2019-10-01

    申请号:CN201910189740.7

    申请日:2019-03-13

    Applicant: 济宁学院

    Abstract: 本发明FIPV基因过量表达的转基因拟南芥株系及其构建方法,属于植物转基因技术领域,构建方法包括:构建FIPV过量表达的表达载体,转化根瘤农杆菌,利用含有表达载体的农杆菌通过浸花法侵染拟南芥,获得FIPV基因过量表达的转基因拟南芥株系;FIPV基因过量表达的转基因拟南芥株系为OE31和OE51。本发明构建的FIPV基因过表达拟南芥转基因株系为首次报道,直接用农杆菌介导的浸花法进行遗传转化,获得FIPV过表达的新种质,为鉴定该基因的功能鉴定提供基础。

    拟南芥FIPV启动子融合GUS基因的表达载体构建方法

    公开(公告)号:CN109706170A

    公开(公告)日:2019-05-03

    申请号:CN201910049124.1

    申请日:2019-01-18

    Applicant: 济宁学院

    Abstract: 本发明是一种拟南芥FIPV启动子融合GUS基因的表达载体构建方法,以拟南芥Col-01周大的植株为材料,采用CTAB法提取其基因组DNA(gDNA),设计特异性引物(F和R)扩增FIPV基因启动子,以提取的gDNA为模板,设计的F和R为特异性引物,进行PCR反应再经过酶切,与Gateway兼容的载体pENTR 3C进行连接,构建克隆载体pENTR FIPV-Promoter,然后将pENTR FIPV-Promoter与包含GUS报告基因的载体pMDC162进行LR反应,得到FIPV-Promoter融合GUS的表达载体pMDC FIPV-Promoter-GUS。

    一种鲁索替尼中间体的制备方法

    公开(公告)号:CN115141180A

    公开(公告)日:2022-10-04

    申请号:CN202210791601.3

    申请日:2022-07-05

    Applicant: 济宁学院

    Abstract: 本发明提供了一种鲁索替尼中间体的制备方法,属于原料药的合成领域。本发明以化合物3‑环戊基‑3‑亚肼基丙腈和2‑甲酰基‑3‑氧丙酸乙酯为原料,经过成环反应、缩合反应、取代反应和成嘧啶环反应得到目标化合物。本发明提供了一种新的合成策略,该方法避免了价格昂贵的钯催化剂的使用,降低了生产成本,规避了重金属残留的风险;同时避免了惰性气体保护带来的工艺风险,降低了工艺难度,合成工艺路线简洁、反应条件温和,副产物少,产品质量高,成本低,适合工业化生产。

    一种鲁索替尼中间体的制备方法

    公开(公告)号:CN115141180B

    公开(公告)日:2023-06-20

    申请号:CN202210791601.3

    申请日:2022-07-05

    Applicant: 济宁学院

    Abstract: 本发明提供了一种鲁索替尼中间体的制备方法,属于原料药的合成领域。本发明以化合物3‑环戊基‑3‑亚肼基丙腈和2‑甲酰基‑3‑氧丙酸乙酯为原料,经过成环反应、缩合反应、取代反应和成嘧啶环反应得到目标化合物。本发明提供了一种新的合成策略,该方法避免了价格昂贵的钯催化剂的使用,降低了生产成本,规避了重金属残留的风险;同时避免了惰性气体保护带来的工艺风险,降低了工艺难度,合成工艺路线简洁、反应条件温和,副产物少,产品质量高,成本低,适合工业化生产。

    一种用于大肠杆菌DH5α感受态细胞的冻干保护剂及其使用方法与应用

    公开(公告)号:CN114574367A

    公开(公告)日:2022-06-03

    申请号:CN202210439488.2

    申请日:2022-04-25

    Applicant: 济宁学院

    Abstract: 本发明公开了一种用于大肠杆菌DH5α感受态细胞的冻干保护剂及其使用方法与应用,属于菌株的冻存和质粒转化技术领域,其由聚乙二醇4000、脱脂奶粉、二甲基亚砜及水组成,每100ml冻干保护剂中各物质的含量为:聚乙二醇4000 0.5~4g,脱脂奶粉10~25g,二甲基亚砜2~8ml,其余体积为水。本发明示例的大肠杆菌DH5α感受态细胞的冻干保护剂,利用活性较高的冻干菌株直接制备感受态细胞,该方法极大地缩短了分子克隆的实验流程,且得到的冻干活性菌株适温性较广,可保存在‑20℃至‑80℃的温度环境中,有效降低了感受态细胞的运输和保藏成本。

    一种提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法

    公开(公告)号:CN112029811A

    公开(公告)日:2020-12-04

    申请号:CN202010745270.0

    申请日:2020-07-29

    Applicant: 济宁学院

    Abstract: 本发明属于微生物发酵技术领域,具体属于一种提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法。本发明在利用三孢布拉氏霉菌进行液体深层发酵时,添加一定浓度的乙烯利溶液,乙烯利缓慢释放出乙烯,乙烯在转录水平上对类胡萝卜素合成相关基因起到促进作用,从而促进了β-胡萝卜素的大量积累,提高β-胡萝卜素的发酵产量。本方法成本低廉、操作简便、效果明显,可以取代通过添加氧载体、表面活性剂、前体物质等各种发酵促进剂来提高β-胡萝卜素的产量,避免了其它发酵促进剂价格太高和对菌种的毒害性,为工业化生产提供了良好的依据。本发明β-胡萝卜素产量比空白对照组提高54%-78%,同时发酵周期由原来的5天缩短为了3天,缩短了40%。

    基于蛋白质组学定量技术分析嗜水气单胞菌感染日本沼虾血细胞差异表达蛋白质的方法

    公开(公告)号:CN111272889A

    公开(公告)日:2020-06-12

    申请号:CN202010084110.6

    申请日:2020-02-10

    Applicant: 济宁学院

    Abstract: 本发明属于淡水养殖的技术领域,涉及基于蛋白质组学定量技术分析嗜水气单胞菌感染日本沼虾血细胞差异表达蛋白质的方法。本发明包括以下步骤:(1)提取感染嗜水气单胞菌的日本沼虾的血淋巴,分离血细胞,裂解细胞提取蛋白质;(2)对步骤(2)获得的蛋白质进行胰蛋白酶酶解,对酶解肽段进行iTRAQ标记;(3)对步骤(3)标记的肽段进行纯化、液相色谱分离和质谱分析;(4)对步骤(3)获得的质谱分析结果进行蛋白质鉴定和定量分析及生物信息学分析,分析获得差异表达蛋白质。本发明基于iTRAQ对受感染日本沼虾的快速蛋白质组学研究,为进一步研究免疫相关蛋白的作用提供参考。

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