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公开(公告)号：CN109988751A
公开(公告)日：2019-07-09
申请号：CN201910035505.4
申请日：2019-01-15
Applicant: 济宁学院
IPC: C12N5/20
Abstract: 本发明公开了一种用于制备抗EGFR全人源化单克隆抗体的细胞株构建方法，在中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶缺陷株CHO/DHFR‑的细胞完成转染步骤后的POOL筛选步骤中，第一阶段利用不含HT的SFM4CHO培养基对整合重链基因的细胞株进行筛选，同时利用培养基中的Blasticidin筛选出整合有轻链基因的细胞株；第二阶段加入MTX以增加整合进细胞株基因组的轻、重链基因拷贝数以提高表达量。首次克隆筛选出适合大试生产工艺的表达量达2.0g/L‑3.0g/L的高效稳定细胞株，产品SEC、pI‑cIEF、脱糖分子量、基于细胞的抗体活性显著提升，为重组抗EGFR人源化单克隆抗体在国内实现产业化提供可能。
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