公开(公告)号：CN119842702A

公开(公告)日：2025-04-18

申请号：CN202311344851.3

申请日：2023-10-17

Applicant: 清华大学

Inventor： 刘俊杰 ,  朱汉舟 ,  张寿悦 ,  刘子贤 ,  李隆骐 ,  陈之航

IPC: C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/11 ,  A61K48/00

Abstract: 本发明公开了一种工程改造的DEAR核酸操纵系统的制备方法。本发明提供了一种工程改造的DEAR核酸操纵系统的制备方法，所述制备方法包括选自以下的至少一项：将原始DEAR核酸操纵系统的RNA分子中的底物识别区延长至具有7～14个核苷酸的长度；在原始DEAR核酸操纵系统的RNA分子的3’末端添加招募序列；将来自原始DEAR核酸操纵系统的第一RNA分子和第二RNA分子中的III结构域中，分别设置第一二聚化基序和第二二聚化基序，使第一RNA分子和第二RNA分子形成异源二聚体。本发明提供的工程改造的DEAR核酸操纵系统的制备方法，进一步提高了基于RNA核酶的DEAR核酸操纵系统的特异性与切割活性。

公开(公告)号：CN118813611A

公开(公告)日：2024-10-22

申请号：CN202310424082.1

申请日：2023-04-19

Applicant: 清华大学

Inventor： 刘俊杰 ,  刘子贤 ,  张寿悦 ,  陈之航

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10 ,  A61K48/00

Abstract: 本发明公开了一种基于RNA核酶的DEAR核酸操纵系统及其应用。本发明提供了一种DEAR核酸操纵系统，其中，所述DEAR核酸操纵系统包含源自细菌的C型第二类内含子的RNA分子，所述RNA分子中包含与靶核酸中的靶序列杂交的底物识别区，所述C型第二类内含子是IV结构域中不存在编码内含子编码蛋白的开放阅读框的C型第二类内含子。本发明提供的基于RNA核酶的DEAR核酸操纵系统避免了CRISPR‑Cas系统存在的由于蛋白分子大，影响转染效率，以及Cas蛋白所带来的潜在免疫原性等问题。本发明提供的基于RNA核酶的DEAR核酸操纵系统可实现DNA、RNA的切割。

公开(公告)号：CN114958808B

公开(公告)日：2024-03-26

申请号：CN202210620492.9

申请日：2022-06-02

Applicant: 清华大学

Inventor： 刘俊杰 ,  张寿悦 ,  李丹苑

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12N15/63 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种小型编辑基因组的CRISPR/Cas系统及其专用的CasX蛋白。CasX蛋白为LesCasX蛋白、VemCasX蛋白、HrbCasX蛋白或CkbCasX蛋白。LesCasX蛋白、VemCasX蛋白、HrbCasX蛋白和CkbCasX蛋白的氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:7所示。实验证明，本发明提供的CasX蛋白具有分子量小、非致病菌来源等特点，在低盐浓度下更接近生理条件，有较好的DNA切割活性，可以作为一个新型小分子量的、更适合AAV包裹的CRISPR‑Cas基因编辑系统。本发明具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN114958808A

公开(公告)日：2022-08-30

申请号：CN202210620492.9

申请日：2022-06-02

Applicant: 清华大学

Inventor： 刘俊杰 ,  张寿悦 ,  李丹苑

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12N15/63 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种小型编辑基因组的CRISPR/Cas系统及其专用的CasX蛋白。CasX蛋白为LesCasX蛋白、VemCasX蛋白、HrbCasX蛋白或CkbCasX蛋白。LesCasX蛋白、VemCasX蛋白、HrbCasX蛋白和CkbCasX蛋白的氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:7所示。实验证明，本发明提供的CasX蛋白具有分子量小、非致病菌来源等特点，在低盐浓度下更接近生理条件，有较好的DNA切割活性，可以作为一个新型小分子量的、更适合AAV包裹的CRISPR‑Cas基因编辑系统。本发明具有重要的应用价值。