表达木质素过氧化物酶的大肠杆菌工程菌、制备方法及其应用

    公开(公告)号:CN103540606B

    公开(公告)日:2015-09-23

    申请号:CN201310544399.5

    申请日:2013-11-06

    Applicant: 湖南大学

    Abstract: 本发明涉及一种大肠杆菌工程菌,本发明还提供一种大肠杆菌工程菌的制备方法,步骤是克隆黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶的基因的cDNA,双酶切上述cDNA,将酶切片段连接pCold-TF载体,鉴定得到的质粒pCold-TF-LiP是否阳性表达,将阳性质粒pCold-TF-LiP导入至大肠杆菌BL21感受态细胞中,获得表达木质素过氧化物酶的大肠杆菌工程菌,本发明还提供大肠杆菌工程菌的应用,方法是将大肠杆菌工程菌接种于液体培养基,液体培养基中加入氨苄青霉素,培养至OD600为0.58~0.62,加入蛋白诱导剂IPTG,诱导重组蛋白表达,本发明的大肠杆菌工程菌表达量高,活性极强,酶活为3528 U/L。

    堆肥化去除土壤中毒死蜱的方法

    公开(公告)号:CN101445413B

    公开(公告)日:2011-09-28

    申请号:CN200810107549.5

    申请日:2008-12-22

    Applicant: 湖南大学

    CPC classification number: Y02W30/43

    Abstract: 本发明公开了一种堆肥化去除土壤中毒死蜱的方法,包括以下步骤:将毒死蜱污染的土壤(浓度≤100mg/kg)除杂、风干,然后与种植业固体废物混合形成堆料,控制堆料的碳氮比及含水率,在堆料中接种一株鞘氨醇单胞菌的菌株,好氧堆置30d~40d即可。本发明的方法不仅能够快速去除土壤中残留的毒死蜱,而且利用种植业固体废物堆肥化处理的产品可作为有机肥料,是一种操作简单、成本低、能够在短时间内去除土壤中残留污染物毒死蜱的方法。

    一种同时提取堆肥样品中PLFA和DNA的方法

    公开(公告)号:CN101261204B

    公开(公告)日:2010-08-25

    申请号:CN200810031165.X

    申请日:2008-04-29

    Applicant: 湖南大学

    Abstract: 本发明提供了一种从同一堆肥样品中同时提取和纯化磷脂脂肪酸PLFA和脱氧核糖核酸DNA的方法,该提取方法是以脂质提取方法为基础,在相分离后,脂质进入有机相,DNA留在水相及固相,最终实现PLFA和DNA的同时提取;本发明的优点是简化了堆肥样品脂质和DNA提取的程序,保证了样品信息来源的同一性,能较好地减小堆肥取样对检测方法造成的误差,同时,在样品量很少的情况下显得更有意义。

    修复2,2’,4,4’-四溴联苯醚污染土壤的方法

    公开(公告)号:CN106424129A

    公开(公告)日:2017-02-22

    申请号:CN201610894681.X

    申请日:2016-10-13

    Applicant: 湖南大学

    Abstract: 本发明公开了一种修复2,2’,4,4’-四溴联苯醚污染土壤的方法,包括以下步骤:将农业固体废物与2,2’,4,4’-四溴联苯醚污染土壤混合得到堆肥原料;在堆肥原料中加入脂肪醇聚氧乙烯醚,并接种红球菌属RAH1菌株,进行堆肥,完成对2,2’,4,4’-四溴联苯醚污染土壤的修复。本发明利用农业固体废弃物修复2,2’,4,4’-四溴联苯醚污染土壤,激发了土壤中土著微生物的潜力,使其在较短的时间内大量繁殖,微生物活性大大上升;并接种RHA1菌株,使其降解污染物的能力得到极大的提高,具有操作维护简单,运行成本低,环境风险小等优势。

    表达木质素过氧化物酶的大肠杆菌工程菌、制备方法及其应用

    公开(公告)号:CN103540606A

    公开(公告)日:2014-01-29

    申请号:CN201310544399.5

    申请日:2013-11-06

    Applicant: 湖南大学

    Abstract: 本发明涉及一种大肠杆菌工程菌,本发明还提供一种大肠杆菌工程菌的制备方法,步骤是克隆黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶的基因的cDNA,双酶切上述cDNA,将酶切片段连接pCold-TF载体,鉴定得到的质粒pCold-TF-LiP是否阳性表达,将阳性质粒pCold-TF-LiP导入至大肠杆菌BL21感受态细胞中,获得表达木质素过氧化物酶的大肠杆菌工程菌,本发明还提供大肠杆菌工程菌的应用,方法是将大肠杆菌工程菌接种于液体培养基,液体培养基中加入氨苄青霉素,培养至OD600为0.58~0.62,加入蛋白诱导剂IPTG,诱导重组蛋白表达,本发明的大肠杆菌工程菌表达量高,活性极强,酶活为3528U/L。

    利用氧化铁纳米材料促进并加速堆肥过程中有机质降解的方法

    公开(公告)号:CN109456093B

    公开(公告)日:2020-10-02

    申请号:CN201910031596.4

    申请日:2019-01-14

    Applicant: 湖南大学

    Abstract: 本发明公开了一种利用氧化铁纳米材料促进并加速堆肥过程中有机质降解的方法,该方法包括以下步骤:将氧化铁纳米材料与堆肥原料混合,对所得混合物进行堆肥。本发明利用氧化铁纳米材料促进并加速堆肥过程中有机质降解的方法,通过利用氧化铁纳米材料提高堆肥过程中相关酶的活性从而促进并加速堆肥过程中总有机质、总有机碳以及水溶性有机碳的降解,因而能够促进并加速堆肥过程中有机质的降解,具有工艺简单、操作方便、处理效率高、处理效果好等优点,对于提高堆肥产品的应用价值和应用范围具有十分重要的意义。

    利用氧化铁纳米材料促进并加速堆肥过程中有机质降解的方法

    公开(公告)号:CN109456093A

    公开(公告)日:2019-03-12

    申请号:CN201910031596.4

    申请日:2019-01-14

    Applicant: 湖南大学

    Abstract: 本发明公开了一种利用氧化铁纳米材料促进并加速堆肥过程中有机质降解的方法,该方法包括以下步骤:将氧化铁纳米材料与堆肥原料混合,对所得混合物进行堆肥。本发明利用氧化铁纳米材料促进并加速堆肥过程中有机质降解的方法,通过利用氧化铁纳米材料提高堆肥过程中相关酶的活性从而促进并加速堆肥过程中总有机质、总有机碳以及水溶性有机碳的降解,因而能够促进并加速堆肥过程中有机质的降解,具有工艺简单、操作方便、处理效率高、处理效果好等优点,对于提高堆肥产品的应用价值和应用范围具有十分重要的意义。

    用于检测链霉菌two-domain漆酶基因的简并引物及其检测方法

    公开(公告)号:CN102660651A

    公开(公告)日:2012-09-12

    申请号:CN201210181804.7

    申请日:2012-06-05

    Applicant: 湖南大学

    Abstract: 本发明用于一种用于检测链霉菌two-domain漆酶基因的简并引物及检测方法,简并引物包括以下上、下游引物:Cu2SF:5’-TACTGGYACTACCACGACCAY-3’;Cu4SR:5’-RTGVSWCTGSACRTGRCAGTG-3’。本发明的检测方法包括以下步骤:以待测样品中的DNA为模板,利用简并引物进行PCR扩增,反应后进行琼脂糖凝胶电泳检测,根据电泳图谱中是否含有380~430bp的单一条带进行初筛;再将初筛回收后的DNA片段克隆测序,将该DNA序列置入核酸数据库中比对,确定待测样品中是否含有链霉菌two-domain漆酶基因。本发明能够快速、准确、特异性地检测链霉菌two-domain漆酶基因。

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