公开(公告)号：CN119410688A

公开(公告)日：2025-02-11

申请号：CN202411529064.0

申请日：2024-10-30

Applicant: 湖州师范学院

Inventor： 李阳 ,  廖俊恺 ,  俞耀威 ,  吴欣晔 ,  吴酬飞 ,  张立钦 ,  吴衡 ,  冯耀宇

IPC: C12N15/78 ,  C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  C12R1/39

Abstract: 本发明属于微生物基因工程领域，特别涉及一种高效敲除荧光假单胞菌flic基因的方法。本发明首先通过活化菌株并进行抗性验证(选择敏感度最高的抗生素)，再利用重叠延伸PCR技术获得了上下游同源臂的融合片段，构建重组质粒载体pT18sacB，然后将S17‑1λpir作为重组质粒的供体菌(携带flic‑pT18sacB质粒)开展结合转移实验，最后使用10％蔗糖诱导双交换，并使用Tc(四环素)进行筛选。本发明高效、简捷，极大的提高了基因敲除的效率，这不仅为荧光假单胞菌基因敲除技术的推广使用提供了重要借鉴，同时也为鞭毛蛋白flic基因的生物学功能研究开辟了新的路径。