公开(公告)号：CN118086173A

公开(公告)日：2024-05-28

申请号：CN202410349018.6

申请日：2024-03-26

Applicant: 湖州师范学院

Inventor： 宋娟 ,  王靖涵 ,  闵莉静 ,  张立钦 ,  胡加付 ,  翁思米 ,  张姚铖 ,  李阳 ,  张绍勇

IPC: C12N5/07

Abstract: 本发明属于细胞培养技术领域，特别涉及一种松材线虫胚胎干细胞的培养方法。所述方法包括如下步骤：S1、无菌松材线虫虫卵的获取；S2、细胞悬液制备：在步骤S1所得虫卵中加入几丁质酶和细胞培养液，离心去上清，加入胰酶消化处理，获得细胞悬液；S3、虫卵细胞的原代培养：28℃普通培养箱中静置培养，定期更换细胞培养液，获得虫卵细胞群；S4、虫卵细胞的传代培养：弃去原代细胞培养液，加入胰蛋白酶消化液室温消化，加细胞培养液培养至细胞贴满瓶底；所述细胞培养液为95％‑98％(V/V)Egg buffer和2％‑5％(V/V)胎牛血清的混合液，细胞培养液pH为6.9‑7.3，渗透压为340mOsm。本申请成功建立了松材线虫胚胎干细胞培养体系，且具有较强的增殖能力和较长的成活时间。