公开(公告)号：CN108753798B

公开(公告)日：2022-05-03

申请号：CN201810559647.6

申请日：2018-06-02

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 林向民 ,  郭壮 ,  林文雄 ,  李薇 ,  汪玉倩

IPC: C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C07K14/195 ,  A61K39/02 ,  A61P31/04

Abstract: 本发明提供一种嗜水气单胞菌疫苗候选外膜蛋白的制备方法及应用，设计外膜蛋白基因克隆引物；通过原核重组，利用体外PCR扩增技术，扩增目的基因片段，构建pET32a原核表达载体重组质粒，转化重组质粒至BL21感受态，获得高表达菌株；通过IPTG诱导剂诱导高表达OMP P5蛋白并通过Ni‑NTA树脂柱纯化该表达蛋白；纯化后的外膜蛋白与弗氏不完全佐剂以1:1体积比完全乳化，所得样品即作为嗜水气单胞菌疫苗的疫苗蛋白。本发明中采用嗜水气单胞菌亚单位疫苗（外膜蛋白）可获得90%以上免疫保护率，相比于传统疫苗，亚单位疫苗具有毒副作用低、免疫原性强和持续时间长、抗体效价高等优点。

公开(公告)号：CN108753798A

公开(公告)日：2018-11-06

申请号：CN201810559647.6

申请日：2018-06-02

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 林向民 ,  郭壮 ,  林文雄 ,  李薇 ,  汪玉倩

IPC: C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C07K14/195 ,  A61K39/02 ,  A61P31/04

CPC classification number: C07K14/195 ,  A61K39/02 ,  A61K2039/552 ,  A61P31/04 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明提供一种嗜水气单胞菌疫苗候选外膜蛋白的制备方法及应用，设计外膜蛋白基因克隆引物；通过原核重组，利用体外PCR扩增技术，扩增目的基因片段，构建pET32a原核表达载体重组质粒，转化重组质粒至BL21感受态，获得高表达菌株；通过IPTG诱导剂诱导高表达OMP P5蛋白并通过Ni‑NTA树脂柱纯化该表达蛋白；纯化后的外膜蛋白与弗氏不完全佐剂以1:1体积比完全乳化，所得样品即作为嗜水气单胞菌疫苗的疫苗蛋白。本发明中采用嗜水气单胞菌亚单位疫苗（外膜蛋白）可获得90%以上免疫保护率，相比于传统疫苗，亚单位疫苗具有毒副作用低、免疫原性强和持续时间长、抗体效价高等优点。