修饰宿主DNA中的对象区域的方法和选择性标记盒

    公开(公告)号:CN101978057B

    公开(公告)日:2012-09-05

    申请号:CN200980110388.8

    申请日:2009-03-23

    CPC classification number: C12N15/1082 C12N15/102

    Abstract: 本发明涉及使用供体DNA修饰宿主DNA中的对象区域的方法:其中所述供体DNA依序包括分别与宿主DNA中的对象区域外侧的5′-侧区、宿主DNA中的对象区域外侧的3′-侧区和宿主DNA中的对象区域内侧的第一同源重组区同源的区域,并且在与3′-侧区同源的区域和与第一同源重组区同源的区域之间还包括第一选择性标记基因、表达诱导启动子和在表达诱导启动子的控制下表达的第二选择性标记基因;该方法包括以下步骤:第一步骤,在5′-侧区和第一同源重组区的区域处进行供体DNA和宿主DNA之间的同源重组,从而基于第一选择性标记基因的表达选择与供体DNA整合的宿主;以及第二步骤,在通过第一步骤与供体DNA整合的宿主DNA内,在源自宿主DNA的3′-侧区和源自供体DNA的3′-侧区这两个区域之间进行同源重组,从而在表达诱导启动子的表达诱导条件下基于第二选择性标记基因的表达选择其对象区域被修饰的宿主。本发明还涉及本方法中使用的选择性标记盒。

    经过修饰的启动子
    5.
    发明公开

    公开(公告)号:CN102575253A

    公开(公告)日:2012-07-11

    申请号:CN201080046567.2

    申请日:2010-10-18

    CPC classification number: C12N15/75 C12N1/20 C12N15/11 C12N15/66 C12P21/02

    Abstract: 本发明提供经过修饰的启动子、各自含有该启动子的表达载体和转化体、以及使用该转化体制备目标基因产物的方法。本发明提供一种经过修饰的启动子,其包含来源于属于芽孢杆菌属细菌的启动子的核苷酸序列,其中至少一个选自如下的核苷酸序列被修饰:SEQ IDNO:1所表示的核苷酸序列;与SEQ ID NO:1所表示的核苷酸序列相当的核苷酸序列,只是其中一个或多个碱基被取代、缺失、添加或插入;以及相对于SEQ ID NO:1所表示的核苷酸序列具有70%或更高的序列一致性的核苷酸序列。

    重组微生物
    9.
    发明授权

    公开(公告)号:CN101652468B

    公开(公告)日:2012-09-19

    申请号:CN200880011110.0

    申请日:2008-04-08

    CPC classification number: C12P21/02

    Abstract: 本发明提供了一种蛋白质或多肽生产率提高的重组微生物,以及使用该重组微生物产生蛋白质或多肽的方法。该重组微生物通过将编码所需的蛋白质或多肽的基因转染到微生物株中而获得,上述微生物株通过如下方法获得:遗传构建以过度表达枯草杆菌secY基因或与secY基因对应的基因,并使选自芽孢形成相关基因和基因组中与芽孢形成相关基因对应的基因的一种或多种基因缺失或灭活。

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