公开(公告)号：CN116670281A

公开(公告)日：2023-08-29

申请号：CN202180086584.7

申请日：2021-12-24

Applicant: 荣研化学株式会社

Inventor： 浅野良则 ,  毛利勇太 ,  中里浩章 ,  纳富继宣

IPC: C12N15/113

Abstract: 核酸扩增方法，包括工序A、工序B和工序C。工序A：使包含由退火区域N3c、环区域BL、以及茎区域B1c和B1构成的结构(a)：5’‑B1c‑BL‑B1‑N3c‑3’的Bw衔接子引物、目标核酸的目标区域退火，以Bw衔接子引物的3’末端作为起点合成与所述目标区域的5’末端侧的碱基序列互补的碱基序列，获得在所述目标区域的互补链的5’末端添加了茎环结构的第一模板核酸。工序B：使包含由退火区域N5’、环区域FL、以及、茎区域F1c和F1构成的结构(c)：5’‑F1c‑FL‑F1‑N5’‑3’、且在3’末端进行了延伸阻碍修饰的Fw衔接子核苷酸、与第一模板核酸退火，以第一模板核酸的3’末端作为起点合成Fw衔接子核苷酸的互补链，获得由在第一模板核酸的3’末端添加了茎环结构的结构(d)：5’‑B1c‑BL‑B1‑N3c‑N5c‑F1c‑FLc‑F1‑3’构成的第二模板核酸。工序C：以第二模板核酸作为模板，使用包含结构(e)：5’‑F1c‑F2‑3’的Fw内引物和包含结构(f)：5’‑B1c‑B2‑3’的Bw内引物，通过LAMP法扩增包含第二模板核酸的N3c和N5c的碱基序列Nc。