公开(公告)号：CN115976157A

公开(公告)日：2023-04-18

申请号：CN202211723747.0

申请日：2022-12-30

Applicant: 黑龙江新和成生物科技有限公司 ,  上虞新和成生物化工有限公司 ,  浙江新和成股份有限公司

Inventor： 曾庆宇 ,  程磊雨 ,  温俊婷 ,  刘辉 ,  陈剑波 ,  姚浩楠 ,  楼一缇

IPC: C12Q1/48 ,  C12Q1/10 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种催化合成L‑抗坏血酸‑2‑葡萄糖苷的环糊精转移酶的高通量筛选方法，包括如下步骤：在待筛选菌株的培养体系中加入β‑环糊精和抗坏血酸，调节pH至5.0‑6.0进行催化反应；催化反应之后去除菌株，加入氧化剂进行氧化反应；氧化反应之后加入L‑抗坏血酸‑2‑葡萄糖苷的显色剂进行显色。本发明通过预氧化的策略，使未反应的抗坏血酸得以去除，再加入能与L‑抗坏血酸‑2‑葡萄糖苷显色的物质，在一定条件下进行反应，并且反应后可以方便地在酶标仪进行检测，从而准确定量反应液体系中L‑抗坏血酸‑2‑葡萄糖苷的含量，为高通量筛选突变菌株带来便利。

公开(公告)号：CN116396946A

公开(公告)日：2023-07-07

申请号：CN202310056341.X

申请日：2023-01-17

Applicant: 黑龙江新和成生物科技有限公司 ,  浙江新和成股份有限公司

Inventor： 程磊雨 ,  童涛 ,  彭晨 ,  张宇 ,  王浩 ,  王福祥 ,  姚浩楠

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/60 ,  C12P19/18

Abstract: 本发明公开了一种糖基转移酶变体及其在AA‑2G制备中的应用，属于酶工程技术领域。本发明通过对环糊精葡萄糖基转移酶的一个或多个氨基酸位点进行突变，获得了催化活性明显提高的突变体，相对活性是野生酶的123％～298％，比酶活可提高至6.76U/mg～16.2U/mg。本发明将构建的突变体用于AA‑2G的酶催化生产，使催化周期相比于野生型的24h显著缩短至10h甚至更短，AA‑2G收率提高至50％以上，且其催化特异性更好，反应产物中无AA‑5G、AA‑6G及AA‑3G等副产物存在。