Abstract:
본 발명은 구제역 바이러스 비구조단백질 3AB을 코딩하는 유전자를 대장균을 이용하여 발현한 재조합단백질과 구제역 바이러스의 비구조 단백질 3B의 특정 항원 결정부위(epitope)에 특이적인 반응성을 가지는 단일클론 항체를 생산하는 방법과 이를 통하여 생산된 단클론항체를 이용하여 구제역 바이러스 비구조단백질에 대한 항체를 검출하는 방법에 관한 것으로, 구제역 바이러스의 단백질 중 동일성이 가장 높은 부위인 비구조단백질에 대한 항체 검출 방법으로 특히 항원결정부위 타겟팅(epitope targeting)을 통하여 구제역 바이러스의 모든 혈청형에 대해 검출이 가능하여 혈청형별 항체 검사를 수행하는 하는 번거로움을 해소할 수 있는 장점을 제공한다. 본 발명에 의한 진단방법은 구제역 바이러스 비구조단백질의 일부인 3AB 펩타이드 또는 재조합단백질과 3B의 에피토프에 특이적으로 반응하는 단일클론 항체 조합을 이용하여 동물의 구제역바이러스의 비구조 단백질에 대한 항체 존재여부를 정량적으로 검출하여 구제역 바이러스 감염을 진단할 수 있는 방법이다. 또한 이 기술은 구제역바이러스에 감염되는 대부분의 유제류에 대해서 각 축종별 이차항체를 따로 사용하는 번거로움 없이 항체 검출이 가능하며 이 기술을 이용하여 차단효소면역검사법 (Blocking ELISA), 경쟁효소면역검사법(Competitive ELISA) 등 다양한 검사기술에 사용하여 구제역 바이러스에 대한 감염항체를 검사할 수 있다. 구제역, 구제역 바이러스, 비구조단백질, 3AB, 단일클론 항체, 차단 효소면역검사법
Abstract:
본 발명은 돼지콜레라 바이러스 E rns 단백질 및 이에 특이적으로 반응하는 단클론항체를 이용한 돼지콜레라 항체 감별 진단방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 국내에서 분리된 다양한 유전형의 돼지콜레라 바이러스(swine fever virus) 중 3종의 E rns 단백질을 코딩하는 유전자를 배큘로바이러스(Baculovirus)를 이용하여 발현한 재조합 돼지콜레라 바이러스 E rns 단백질, 및 상기 E rns 단백질에 특이적으로 반응하는 단클론항체(monoclonal antibody)를 이용하여 돼지콜레라 E rns 에 대한 항체를 검사하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 단클론항체를 이용하는 경우에 E rns 에 대한 항체를 검출할 수 있어 야외에서 감염된 돼지콜레라 바이러스 항체를 용이하게 감별 진단할 수 있으며, 또한 본 발명의 진단 방법은, 3종의 재조합 단백질을 동시에 이용하는 경우에 돼지콜레라 바이러스의 모든 유전형에 대해 유전형에 관계없이 일정한 민감도를 나타내므로, 돼지콜레라 바이러스에 대한 항체를 용이하게 검출할 수 있다. 돼지 콜레라 바이러스, 이알엔에스, 단클론항체, 감별 ELISA
Abstract:
A method for screening and detecting a swine fever virus antibody is provided to easily screen and diagnose infected swine fever virus antibody by using a monoclonal antibody specifically reacting with a recombinant swine fever virus Erns protein and secure constant sensitivity regardless of all genotypes of the swine fever virus when using all three kinds of recombinant protein. A recombinant swine fever virus Erns is prepared by expressing a gene encoding three Erns proteins among swine fever viruses having various genotypes using baculovirus. A method for preparing a monoclonal antibody specifically reacting to the Erns comprises the steps of: (a) constructing a swine fever virus LOM strain-derived Erns recombinant gene using a baculovirus expression system; and (b) producing the monoclonal antibody using the recombinant Erns protein. A method for screening and detecting a swine fever virus antibody comprises the steps of: (a) mixing three kinds of Erns recombinant proteins at proper concentration to prepare an antigen cocktail; (b) after diluting the antigen cocktail into a coating buffer solution, pouring it in a plate to be absorbed into the plate; (c) washing the recombinant antigen not-absorbed into the plate to remove it; (d) adding a sample to be tested to the plat to allow the reaction; (e) washing the sample to be tested not specifically bound to the recombinant Erns antigen protein absorbed into the plate to remove it; (f) adding a monoclonal antibody not being bound to the enzyme but being specifically reacted to the Erns protein to allow the reaction; (g) washing the monoclonal antibody not being bound to the recombinant Erns antigen protein absorbed into the plate to remove it; and (h) adding a substrate reacting with the enzyme to determine the swine fever virus infection.
Abstract:
A method for detecting swine fever virus or bovine viral diarrhea virus(BVDV) existing in blood or tissue of pig and cow is provided to detect the swine fever virus or BVDV with high specificity and also identify genotypes rapidly and accurately through one testing process. A method for testing swine fever genes using a gene chip comprises the steps of: (a) extracting RNA from swine serum or blood; (b) amplifying the extracted RNA through multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR); (c) hybridizing the amplified swine fever gene with the gene chip; and (d) identifying the specifically coupled swine fever gene through the hybridization and a genotype thereof. A gene chip comprises : at least one forward sequence selected from the group consisting of at least one sequence selected from the group consisting of SEQ ID : NOs. 1-13 and a probe having at least 10-mer sequence homology to the sequences of the SEQ ID : NOs. 1-13; and a reverse sequence of the forward sequence and the probe having at least 10-mer sequence homology to the sequences and is used for identifying the swine fever and BVDV to be positive and identifying the kind and location of the probe used in an oligonucleotide chip for testing genotypes. A method for testing swine fever virus or BVDV comprises a step of testing a swine fever virus gene or a BVDV gene using the gene chip.
Abstract translation:本发明提供一种检测猪,牛血液或组织中存在的猪瘟病毒或牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,以高特异性检测猪瘟病毒或BVDV,并通过一次检测过程快速,准确地鉴定基因型。 使用基因芯片测试猪瘟基因的方法包括以下步骤:(a)从猪血清或血液中提取RNA; (b)通过多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增提取的RNA; (c)将扩增的猪瘟基因与基因芯片杂交; 和(d)通过杂交及其基因型鉴定特异性偶联的猪瘟基因。 基因芯片包含:至少一种选自SEQ ID NO: 1-13和与SEQ ID NO:的序列具有至少10-mer序列同源性的探针。 1-13; 以及与序列具有至少10-mer序列同源性的正向序列和探针的反向序列,并用于鉴定猪发热和BVDV为阳性,并鉴定用于寡核苷酸芯片中的探针的种类和位置 测试基因型。 一种用于测试猪瘟病毒或BVDV的方法包括使用该基因芯片测试猪瘟病毒基因或BVDV基因的步骤。
Abstract:
본 발명은 돼지콜레라 바이러스(Hog cholera virus; HCV 또는 Classical swine fever virus; CSFV)와 소바이러스성설사증 바이러스(Bovine viral diarrhea virus; BVDV) 유전자 및 이들 유전자형을 검사하는 방법 및 이를 이용한 정밀검사키트에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 역전사 중합효소 연쇄반응(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction; RT-PCR) 방법과 유전자칩을 이용하여 동일한 페스티바이러스(Pestivirus)에 속하며 동물에 질병을 일으키는 돼지콜레라 바이러스(Hog cholera virus; HCV 또는 Classical swine fever virus; CSFV)와 소바이러스성설사증 바이러스(Bovine viral diarrhea virus; BVDV) 유전자 및 이들 유전자형을 검사하는 방법, 및 이를 이용한 정밀한 진단키트에 관한 것이다. 본 발명의 발명을 이용하여 돼지 및 소 혈액 또는 조직에 존재하는 돼지콜레라 바이러스 또는 소바이러스성설사증 바이러스를 높은 특이성으로 검출할 수 있을 뿐만 아니라, 동시에 유전자형도 감별할 수 있다. 또한, 기존 검사 방법으로는 여러 단계를 거쳐 시험하여 확인했던 검사 과정을 한 번의 검사 과정으로 돼지콜레라 바이러스 및 소바이러스성설사증 바이러스 유전자 및 이의 유전형까지 신속 정확하게 감별할 수 있으므로 매우 경제적이다. 돼지콜레라, 돼지콜레라 바이러스, 소바이러스성설사증, 소바이러스성설사증 바이러스, Multiplex RT-PCR, 유전자칩, 유전자칩 검사법, 동물용 유전자칩, 구아닌칩, SNP.
Abstract:
본 발명은 구제역 바이러스 비구조단백질 3AB을 코딩하는 유전자를 대장균을 이용하여 발현한 재조합단백질과 구제역 바이러스의 비구조 단백질 3B의 특정 항원 결정부위(epitope)에 특이적인 반응성을 가지는 단일클론 항체를 생산하는 방법과 이를 통하여 생산된 단클론항체를 이용하여 구제역 바이러스 비구조단백질에 대한 항체를 검출하는 방법에 관한 것으로, 구제역 바이러스의 단백질 중 동일성이 가장 높은 부위인 비구조단백질에 대한 항체 검출 방법으로 특히 항원결정부위 타겟팅(epitope targeting)을 통하여 구제역 바이러스의 모든 혈청형에 대해 검출이 가능하여 혈청형별 항체 검사를 수행하는 하는 번거로움을 해소할 수 있는 장점을 제공한다. 본 발명에 의한 진단방법은 구제역 바이러스 비구조단백질의 일부인 3AB 펩타이드 또는 재조합단백질과 3B의 에피토프에 특이적으로 반응하는 단일클론 항체 조합을 이용하여 동물의 구제역바이러스의 비구조 단백질에 대한 항체 존재여부를 정량적으로 검출하여 구제역 바이러스 감염을 진단할 수 있는 방법이다. 또한 이 기술은 구제역바이러스에 감염되는 대부분의 유제류에 대해서 각 축종별 이차항체를 따로 사용하는 번거로움 없이 항체 검출이 가능하며 이 기술을 이용하여 차단효소면역검사법 (Blocking ELISA), 경쟁효소면역검사법(Competitive ELISA) 등 다양한 검사기술에 사용하여 구제역 바이러스에 대한 감염항체를 검사할 수 있다. 구제역, 구제역 바이러스, 비구조단백질, 3AB, 단일클론 항체, 차단 효소면역검사법