Abstract:
본 발명은 사람 글루타민 합성효소 (glutamine synthase, GS) 유전자를 이용하여 동물세포에서 재조합 단백질을 고수율로 생산하는 방법에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 메티오닌 설폭시민 (methionine sulfoximine, MSX)에 의하여 증폭되는 글루타민 합성효소 유전자를 이용하여 외래 유전자를 대량으로 발현할 수 있는 발현 벡터, 이를 이용하여 얻은 재조합 에리트로포이에틴을 고수율로 생산하는 세포주 및 그의 제조 방법 그리고 이로부터 에리트로포이에틴을 얻는 제조 방법에 관한 것으로서, 상기 발현 벡터를 이용하면 다양한 재조합 단백질을 생산하는 세포주를 단일 단계의 증폭 과정을 거쳐 용이하게 선발할 수 있어 활성이 우수한 재조합 단백질을 CHO 세포 등에서 효과적으로 생산할 수 있다.
Abstract:
PURPOSE: Provided are an expression vectors containing human glutamine synthase gene and a process for producing erythropoietin from an animal cell using the same vector, thereby producing the erythropoietin having improved activity in a higher yield. CONSTITUTION: The expression vector capable of mass-expressing a foreign gene from an animal cell is produced by inserting a human glutamine synthase gene connected to the downstream of a SV40 promoter, wherein 128 to 270 bases are removed, into an expression vector pcDNA, in which the expression vector pcDNA-gs has a restriction enzyme map of figure 3. A transformant E. coli/pcDNA-gs (KCTC 8860 P) is produced by transformation of E. coli with the expression vector pcDNA-gs. The expression vector pcDNA-EPO-dE1-gs is capable of producing erythropoietin in a higher yield. A transformant E. coli/pcDNA-EPO-dE1-gs is produced by transformation of E. coli with the expression vector pcDNA-EPO-dE1-gs. The erythropoietin is produced by fermenting the transformants in a methionine sulfoximine-increased medium to select the cell lines capable of producing erythropoietin in a higher yield and fermenting the cell lines.