公开(公告)号：KR100308758B1

公开(公告)日：2001-09-24

申请号：KR1019990004939

申请日：1999-02-12

Applicant: 한국과학기술연구원 ,  주식회사 녹십자홀딩스

Inventor： 홍효정 ,  박성섭 ,  허향숙

IPC: A61K39/00

Abstract: 본발명은 B형간염바이러스 (hepatitis B virus)의표면항원프리-S2에대한인간화항체 (humanized antibody)에관한것으로서, 구체적으로 HBV 표면항원프리-S2 에대한생쥐단일클론항체의가변영역과가장유사한사람유전자를이용하여 HBV 표면항원프리-S2 에대한기존인간화항체 (대한민국특허제102173호)의생쥐유래의아미노산잔기를감소시킴으로인체면역반응을현저히감소시킬수 있는 HBV 프리-S2 에대한인간화항체의중쇄 (heavy chain) 유전자및 경쇄 (light chain) 유전자, 이를포함하는발현벡터, 상기발현벡터로형질전환시킨형질전환체그리고상기형질전환체를배양하여 HBV 표면항원프리-S2 에대한인간화항체를제조하는방법으로구성되며, 상기과정으로얻은본 발명의인간화항체는기존의인간화항체와유사한항원결합능을유지하면서기존의인간화항체보다면역유발능을현저히감소시킴으로 HBV 감염의예방과 B형만성간염의치료에효과적으로이용될수 있다.

公开(公告)号：KR100267720B1

公开(公告)日：2001-03-02

申请号：KR1019970076923

申请日：1997-12-29

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 홍효정 ,  박흥록 ,  박성섭

IPC: C12N15/12

Abstract: PURPOSE: Provided are an expression vectors containing human glutamine synthase gene and a process for producing erythropoietin from an animal cell using the same vector, thereby producing the erythropoietin having improved activity in a higher yield. CONSTITUTION: The expression vector capable of mass-expressing a foreign gene from an animal cell is produced by inserting a human glutamine synthase gene connected to the downstream of a SV40 promoter, wherein 128 to 270 bases are removed, into an expression vector pcDNA, in which the expression vector pcDNA-gs has a restriction enzyme map of figure 3. A transformant E. coli/pcDNA-gs (KCTC 8860 P) is produced by transformation of E. coli with the expression vector pcDNA-gs. The expression vector pcDNA-EPO-dE1-gs is capable of producing erythropoietin in a higher yield. A transformant E. coli/pcDNA-EPO-dE1-gs is produced by transformation of E. coli with the expression vector pcDNA-EPO-dE1-gs. The erythropoietin is produced by fermenting the transformants in a methionine sulfoximine-increased medium to select the cell lines capable of producing erythropoietin in a higher yield and fermenting the cell lines.

公开(公告)号：KR100250831B1

公开(公告)日：2000-04-01

申请号：KR1019970030694

申请日：1997-07-02

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 홍효정 ,  류춘제

IPC: C12N15/13

Abstract: PURPOSE: Provided is cDNA gene coding rat's monoclonal antibody KR359 which binds with 21-28 amino acids of antigen pre-S1 epitope of hepatitis B virus in order to use the gene to bind with human antibody genes and consequently develop human antibodies with fewer side effects. CONSTITUTION: cDNA gene coding rat's monoclonal antibody KR359 is obtained by the following steps of: i) extracting RNA from hybridoma cell line (KCTC 0284 BP) and synthesizing cDNA for light and heavy chains; ii) implementing PCR with cDNA as a template and a primer of sequence ID. No. 1 of 5'-GCAGTCGACT GAGGCACCTC CAGATGTTAA C-3' for a light chain and a primer of sequence ID. No. 2 of 5'-CGGTCGACAG GGATCCAGAG TTCCAGGTCA C-3' for a heavy chain; iii) and obtaining 420bp cDNA of sequence ID. No. 8 described as in the description as a light chain and 500bp cDNA of sequence ID. No. 9 described as in the description as a heavy chain. Wherein, cDNA is also used in constructing plasmid vectors pKR359H and pKR359K.

Abstract translation: 目的：提供编码大鼠单克隆抗体KR359的cDNA基因，其与乙型肝炎病毒的抗原前S1表位的21-28个氨基酸结合，以使用该基因与人抗体基因结合，从而开发具有较少副作用的人抗体 。 构成：通过以下步骤获得编码大鼠单克隆抗体KR359的cDNA基因：i）从杂交瘤细胞系（KCTC 0284BP）提取RNA并合成轻链和重链的cDNA; ii）以cDNA作为模板和序列ID的引物进行PCR。 5'-GCAGTCGACT GAGGCACCTC CAGATGTTAA C-3'的1号和序列ID的引物。 5'-CGGTCGACAG GGATCCAGAG TTCCAGGTCA C-3'的2号为重链; iii）获得序列ID的420bp cDNA。 在描述中描述的8号作为轻链和序列ID的500bp cDNA。 在描述中描述的第9号是重链。 其中，cDNA也用于构建质粒载体pKR359H和pKR359K。

公开(公告)号：KR1019990000214A

公开(公告)日：1999-01-15

申请号：KR1019970022957

申请日：1997-06-03

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 홍효정 ,  김윤규 ,  류춘제 ,  박성섭

IPC: C12N5/10

Abstract: 본 발명은 에리트로포이에틴 (erythropoietin, 이하 'EPO'라고 약칭함)을 생산하는 세포주 및 이를 이용한 EPO 의 제조방법에 관한 것이다.
보다 상세하게는, 본 발명은 dhfr (dihydrofolate reductase)유전자 및 EPO 유전자를 포함한 발현 벡터로 형질전환된 EPO 를 생산하는 세포주를 낮은 메토트렉세이트 (Methotrexate, MTX) 농도에서 장기 계대배양하여 선별한 EPO 를 효율적으로 생산하는 세포주, 그의 제조방법 그리고 본 발명의 세포주를 이용하여 고역가의 EPO 를 대량으로 생산하는 방법에 관한 것이다.

公开(公告)号：KR1019960037837A

公开(公告)日：1996-11-19

申请号：KR1019950009865

申请日：1995-04-26

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 홍효정 ,  염선분 ,  김희선

IPC: C07K14/02

Abstract: 본 발명은 B형 간염 바이러스(hepatits B virus, HBV)의 표면항원인 프리-S1 단백질과 대장균의 글루타티온-S-전이효소(glutathione-S-transferase, GST)의 융합단백질, 상기 융합단백질을 코드하는 유전자를 포함하는 발현벡터, 상기 발현벡터로 형질전환된 대장균 및 이를 배양하는 것을 포함하는 HBV 프리-S1 단백질의 제조 방법에 관한 것으로, 본 발명의 프리-S1 단백질들은 대장균에서 수용성 형태로 생산되며 항원성과 면역유발능을 나타낸다.

公开(公告)号：KR100345469B1

公开(公告)日：2003-01-15

申请号：KR1019980049664

申请日：1998-11-19

Applicant: 주식회사 녹십자홀딩스 ,  한국과학기술연구원

Inventor： 홍효정 ,  류춘제 ,  허향숙

IPC: C12N15/51 ,  C12N15/62

Abstract: PURPOSE: Humanized antibody on surface antigen pre-S1 of hepatitis B virus (HBV) is provided which is derived from mouse monoclonal antibody (KR 359) The humanized antibody maintains the affinity on the antigen but decreases the antigenecity of mouse antibody on the human body by changing amino acid residues specific for mouse into human specific one. CONSTITUTION: Humanized variable region of heavy chain is derived from variable region of heavy chain of human antibody DP67 substituted into mouse framework residues and complementarity-determining region (CDR)1, and 3 and part of 2. Complete humanized heavy chain is constructed by joining leader sequence for secretion, constant region of heavy chain from pRC/CMV-HC-HuS, and humanized variable region. Humanized variable region of light chain is derived from variable region of light chain of human antibody DPK9 substituted into mouse framework residues and complementarity-determining region (CDR)1, 2, and 3. Complete humanized light chain is constructed by joining leader sequence for secretion, constant region of heavy chain from pKC-hr-HuS, and humanized variable region. Each complete chain is cloned into expression vector, pRc/CMV, and transfected into COS7 cell for the production of antibody.

Abstract translation: 目的：提供乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原pre-S1上的人源化抗体，其衍生自小鼠单克隆抗体（KR 359）。人源化抗体保持对抗原的亲和力但降低小鼠抗体对人体的抗原性 通过将对小鼠特异性的氨基酸残基改变为人类特异性氨基酸残基。 构成：重链的人源化可变区来自人抗体DP67的重链可变区，取代成小鼠框架残基和互补决定区（CDR）1和3以及部分2.完整的人源化重链通过连接 分泌的前导序列，来自pRC / CMV-HC-HuS的重链恒定区和人源化可变区。 轻链的人源化可变区来源于人抗体DPK9的轻链可变区，被取代到小鼠框架残基和互补决定区（CDR）1,2和3中。完整的人源化轻链通过将用于分泌的前导序列 ，来自pKC-hr-HuS的重链恒定区和人源化可变区。 将每个完整链克隆到表达载体pRc / CMV中，并转染到COS7细胞中以产生抗体。

公开(公告)号：KR100246127B1

公开(公告)日：2000-03-15

申请号：KR1019970030695

申请日：1997-07-02

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 홍효정 ,  류춘제 ,  김윤규 ,  김희선 ,  현병화 ,  김명수 ,  진은희

IPC: C07K16/08

Abstract: 본 발명은 B형 간염 바이러스 (HBV)의 표면항원 프리-S1 (pre-S1)에 결합하는 단일클론항체, 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 그의 제조방법에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 HBV 표면항원 프리-S1 의 21-28번 아미노산을 포함하는 에피토프를 특이적으로 인식하는 생쥐 단일클론항체에 관한 것으로서, 이는 여러 아형 및 변이 HBV 를 중화시킬 수 있어 HBV 감염을 예방하고 치료하는데 널리 사용될 수 있다.

公开(公告)号：KR100209783B1

公开(公告)日：1999-07-15

申请号：KR1019960042181

申请日：1996-09-24

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 홍효정 ,  김윤규

IPC: C07K14/705

Abstract: 본 발명은 B형 간염 바이러스를 구성하는 4가지 단백질 중 바이러스 외피를 구성하는 표면항원 pre S 단백질의 아미노 말단 2번째 및 3번째 아미노산이 라이신으로 치환된 항원 변이단백질이 중복되어 있는 새로운 pre S 항원 단백질 및 이를 대장균에서 제조하는 방법에 관한 것으로서, 본 발명의 중복된 pre S 항원 단백질은 높은 항원성을 나타내므로 B형 간염 바이러스에 대한 효과적인 백신으로 유용하게 사용될 수 있다.

公开(公告)号：KR1019990008647A

公开(公告)日：1999-02-05

申请号：KR1019970030694

申请日：1997-07-02

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 홍효정 ,  류춘제

IPC: C12N15/13

Abstract: 본 발명은 B형 간염 바이러스 (HBV)의 표면 항원 프리-S1 에피토프에 결합하는 생쥐 단일클론항체의 가변 영역, 그의 cDNA 유전자 및 그의 염기 서열에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 HBV 의 표면항원 프리-S1 의 21-28번 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 생쥐 단일클론항체의 가변 영역, 이를 암호하는 중쇄와 경쇄 cDNA 유전자, 그들의 염기 서열 및 이를 포함하는 플라스미드 벡터들에 관한 것으로서, 상기 유전자는 HBV 감염을 예방하고 치료하는 인간화 항체 등을 개발하는데 사용될 수 있다.

公开(公告)号：KR100162021B1

公开(公告)日：1998-11-16

申请号：KR1019950022441

申请日：1995-07-27

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 홍효정 ,  김윤규 ,  류춘제 ,  김상직 ,  박홍록 ,  이상철

IPC: C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N15/16 ,  C12N15/63

Abstract: 본 발명은 플라스미드 pCMV-dhfr 및 이것을 이용하여 에리트로포이에틴(Erythropoietin;이하 EPO라고 약칭한다)을 제조하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 특히 dhfr 유전자가 연결되어 있는 SV40 프로모터 128-270 부위를 제거하여 pRc/CMV에 삽입하여 발현벡타 pCMV-dhfr을 만들고 여기에 인간 EPO 유전자를 클로닝하여 pEpoG-dhfr 또는 pEpoC-dhfr을 만든후 이것으로 CHO 세포를 형질전환시켜 얻은 세포주 g2 또는 ECl으로부터 2nM 이하의 낮은 농도의 MTX 함유 α-MEM 배지에서 고역가의 EPO를 경제적으로 제조하는 방법에 관한 것이다.