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公开(公告)号：CN103421826A
公开(公告)日：2013-12-04
申请号：CN201310006089.8
申请日：2013-01-08
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及从苦豆子中分离克隆一个SaVP1基因，该基因的cDNA序列如序列表SEQ ID NO：1所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。功能验证表明，该基因能提高拟南芥对高温的耐受性和在高温条件下的产量，同时具有提高拟南芥花器官中生长素的含量，进而提高高温下拟南芥的结实能力。
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公开(公告)号：CN102816848A
公开(公告)日：2012-12-12
申请号：CN201210302878.1
申请日：2012-08-24
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明公开了一种miRNA分子标记的制备方法，其步骤是：1）用已知的128个SRAP引物与23个保守的pre-miRNA引物，利用两两组合的方式对鄂棉22和海岛棉品系3-79两个亲本进行多态性筛选；2）两个亲本杂交获得F1代，然后用鄂棉22做父本回交获得BC1群体；3）提取两个亲本，F1代和BC1群体的gDNA；4）用步骤1）中筛选出的多态性引物对3）中的gDNA进行多态性筛选；5）记录扩增产物信息；6）利用作图软件获得pre-miRNA的染色体定位。方法易行，操作简便，费用低廉，能高效快捷的发掘miRNA分子标记，而且由于SRAP引物设计的特点，所得的miRNA标记可能为功能基因，对今后miRNA的研究具有一定的参考价值。
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公开(公告)号：CN101880714B
公开(公告)日：2012-08-22
申请号：CN201010196031.0
申请日：2010-06-04
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明属于棉花分子育种技术领域，具体涉及一种构建棉花纤维转录图谱的方法，步骤如下：以海岛棉Pima 3-79为父本，陆地棉鄂棉22为母本，杂交得F1；种植F1，使F1自交，得到F2；以该F2单株作为纤维转录图谱作图的起始材料；提取所述田间F2单株开花后5天的纤维的RNA，并反转录为cDNA，作为转录图谱的作图群体；利用报道的EST-SSR引物和自行设计的如序列表SEQ ID NO：1-90所示的引物分别对F2单株进行作图群体分析，用变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析；最后利用MAPMAKER/EXP.3.0作图软件分析数据，制作获得转录图谱。与现有方法相比本发明的方法简捷实用，QTL定位更加准确，便于棉花纤维发育相关基因的克隆。
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公开(公告)号：CN102304507A
公开(公告)日：2012-01-04
申请号：CN201110186185.6
申请日：2011-07-05
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明属于棉花分子育种技术领域，具体是一种使单态性SSR标记转变为多态性标记的方法。它包括以下步骤：(1)8％非变性聚丙烯酰胺凝胶的制备，丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为25-30∶1，10x TBE 100ml，然后用蒸馏水定容至1L；(2)常规电泳条件下单态性SSR引物对作图群体两亲本的PCR扩增，PCR反应体系(10ul)为：DNA模板25ng，1x Buffer，2.0mmol L-1 MgCl2，0.25mmolL-1 dNTPs，0.2μmol L-1 primer，0.8U Taq DNA聚合酶，不足部分用无菌的双蒸水补齐；(3)扩增产物在8％非变性聚丙烯酰胺凝胶上的电泳；(4)产生多态性的SSR引物。本发明的方法费用低廉、操作简捷、适用范围广泛，是有效使单态性SSR标记产生多态性的方法，极大地提高了SSR标记的利用效率。
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公开(公告)号：CN101011027B
公开(公告)日：2010-12-22
申请号：CN200710063650.0
申请日：2007-02-07
Applicant: 华中农业大学
CPC classification number: Y02A40/162
Abstract: 本发明属于棉花转基因技术领域，公开了超声波辅助农杆菌转化棉花胚芽的培育转基因棉花的新方法。包括：将剥掉种皮消毒后棉种接种到无菌苗萌发培养基上，将刚萌发两片子叶剥离，置润湿的无菌滤纸上，将10ml 0.5 OD600nm的农杆菌菌液加入到塑料离心管或玻璃小三角瓶中并将剥好的胚芽加到农杆菌液中，将离心管或者小三角瓶放在超声波清洗器中的中央，用100-150W的超声波处理1-5min，将处理过的胚芽转移至共培养培养基培养，再用含头孢霉素的无菌水冲洗，吸干胚芽表面水分，转移至恢复培养基上，在光照下恢复培养得到幼芽，将其转到选择培养基继代，得到抗性芽，将其切下转移至生根培养基上诱导生根或嫁接在棉花砧木上，得到再生转基因植株。本发明将GFP(绿色荧光蛋白)基因在胚芽的瞬时表达率提高100多倍；首次实现了海岛棉(长绒棉)的转基因植株；获得了一批转抗虫基因的棉花植株。分子及田间实验检测表明，外源基因已经稳定转入到受体棉花基因组中并能稳定表达和遗传。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101020924A
公开(公告)日：2007-08-22
申请号：CN200610166552.5
申请日：2006-12-30
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于棉花育种领域，涉及一种海岛棉EST－SSR引物序列的制备技术及应用，利用这些引物进行棉花遗传多样性的评价、分子遗传连锁构建和棉花重要性状的QTL定位。步骤包括：1)建立海岛棉品系Pima3－79纤维发育的cDNA文库，从单一序列中挑出占其中富含二、三、四、五或六核苷酸重复且长度≥10碱基的EST；2)设计SSR侧翼引物；3)从田间取基因型为AA、DD和AADD的棉种材料和亲本鄂棉22、Pima3－79以及BC1群体植株的嫩绿叶片提取其总DNA；4)用设计的SSR引物扩增步骤3)所示的材料和群体；5)计算每对引物的多态性信息含量，并对步骤3)所示的基因型棉种材料作聚类和主坐标分析；6)将BC1作图群体扩增的EST－SSR整合到种间遗传连锁图谱相应的连锁群上，并作棉花重要性状的QTL定位。结果显示，位于连锁群15的引物HAU033与籽指性状连锁，位于连锁群29的引物HAU100与单株铃数性状连锁；分别贡献了表型变异的7.41％和5.95％。
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公开(公告)号：CN1300166C
公开(公告)日：2007-02-14
申请号：CN200410060637.6
申请日：2004-07-27
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于棉花分子生物学中RNA抽提技术领域。公开了一种新的利用硫氰酸胍-氯仿抽提、酚纯化棉花RNA的抽提方法。针对棉花的酚类、多糖类等和次生代谢物质对抽提纯化高质量RNA样品的影响，制备了新的裂解液和抽提工艺。利用高浓度的硫氰酸胍裂解细胞同时抑制细胞内源核酸酶的活性。该裂解液中含有聚乙烯吡咯烷酮4000和β-巯基乙醇，用于抑制棉花中多酚类物质的氧化。利用氯仿抽提以除去部分多糖，多酚和蛋白质。将粗提物用裂解液溶解后利用水饱和酚以更有效地去除多糖和蛋白质。本发明具有经济、快速、稳定的特点，抽提的RNA样品质量较高。
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公开(公告)号：CN119859707A
公开(公告)日：2025-04-22
申请号：CN202510218218.2
申请日：2025-02-26
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了用于鉴定陆地棉抗高温种质的SNP位点及其应用，属于分子生物学检测技术领域，提供了用于鉴定陆地棉抗高温种质的SNP位点，所述SNP位点为SNP1和SNP2；SNP1位于陆地棉D12染色体上第42577154位，核苷酸为T/C；SNP2位于陆地棉D12染色体上第42577814位，核苷酸为A/T。还提供了所述SNP位点在制备鉴定陆地棉抗高温种质产品中的应用。本发明提供两个与陆地棉花粉抗高温表型连锁的SNP位点和用于检测PCR引物，丰富了陆地棉抗高温基因资源，加速陆地棉的抗高温育种进程。
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公开(公告)号：CN113215161B
公开(公告)日：2025-04-01
申请号：CN202110609717.6
申请日：2021-06-01
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/82 , A01H4/00 , A01H5/12 , A01H6/60
Abstract: 本发明涉及除草剂技术领域，且公开了利用单碱基编辑技术创造除草剂抗性植物的方法，包括以下步骤：1)GhEPSP基因的sgRNA设计：选择陆地棉5‑烯醇式丙酮酰莽草酸‑3‑磷酸合酶(5‑Enolpyruvylshikimate‑3‑phosphatesynthase，EPSP合酶)为验证基因，利用在线软件CRISPR‑P(http：//cbi.hzau.edu.cn/cgi‑bin/CRISPR)(Lei et al 2014)在基因外显子区域设计sgRNA靶标序列，并且在编辑窗口内C‑T突变改变氨基酸功能的靶点，最终选择1个sgRNA用来构建单碱基系统植物表达载体。该利用单碱基编辑技术创造除草剂抗性植物的方法，在棉花中首次成功应用棉花基因组特性的单碱基编辑系统对棉花GhEPSP实现单碱基突变，突变位点未见其他作物报道，通过叶片草甘膦涂抹实验，表现出一定的草甘膦耐受性，提高了棉田除草效率，降低了人工除草成本，防范棉田超级杂草。
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公开(公告)号：CN118813857B
公开(公告)日：2025-03-18
申请号：CN202411146557.6
申请日：2024-08-20
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于分子标记辅助育种技术领域，尤其涉及位于GhHD16基因下游调控区域的Indel抗旱分子标记及其应用。所述Indel抗旱分子标记位于GhHD16基因下游调控区域第7606碱基处，GhHD16基因及其下游调控区域的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；在抗旱棉花种质中，Indel抗旱分子标记的核苷酸序列为CCTTCACGCGT，在敏旱棉花种质中，Indel抗旱分子标记的核苷酸序列为T。本发明的分子标记与抗旱隶属函数值表型值紧密连锁，且其基因型与陆地棉综合抗旱能力具有较高的一致性，通过检测该分子标记基因型，可实现在基因型层面高效、准确预测陆地棉种质资源对干旱胁迫的抗性或耐受性。
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