公开(公告)号：CN108251456A

公开(公告)日：2018-07-06

申请号：CN201810065368.4

申请日：2018-01-23

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 梁银明 ,  张黎琛 ,  卢燎勋 ,  王旭刚 ,  黄蓉 ,  晁天柱 ,  郑前前 ,  罗静 ,  谷妍蓉

IPC: C12N15/90 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明涉及一种NOD遗传背景的动脉粥样硬化小鼠模型的制备方法，属于基因工程和遗传修饰技术领域。本发明首次将NOD遗传背景小鼠中的ApoE和LDLR基因进行同时敲除，获得了NOD遗传背景小鼠的能产生动脉粥样硬化的基因敲除小鼠模型。本发明获得NOD遗传背景的动脉粥样硬化小鼠模型的主动脉有明显的动脉粥样硬化斑块形成，与传统经典的动脉粥样硬化模型C57B/L6背景ApoE基因敲除小鼠相比，其发病程度一致，本发明的方法为研究者提供一种全新的NOD遗传背景动脉粥样硬化的基因敲除小鼠模型，对动脉粥样硬化的基础理论研究和临床诊断治疗具有十分重要的应用价值。

公开(公告)号：CN107435069A

公开(公告)日：2017-12-05

申请号：CN201710633469.2

申请日：2017-07-28

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 卢燎勋 ,  张黎琛 ,  梁银明 ,  黄蓉 ,  晁天柱 ,  郑前前 ,  罗静 ,  谷妍蓉 ,  袁鹏

IPC: C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/686 ,  C12Q2563/107 ,  C12Q2545/101

Abstract: 本发明涉及一种细胞系CRISPR/Cas9基因敲除的快速检测方法，属于基因工程技术领域。本发明通过直接裂解法能快速获得细胞基因组DNA，结合荧光PCR技术以及基于测序仪的毛细管电泳方法，可以在短时间内精确地对多个基因位点敲除的单克隆细胞进行大规模基因型鉴定。本发明不需要使用试剂盒抽提基因组DNA，对细胞的处理时间只需要25min，极大地节省了经济和时间成本，灵敏度和精确度极高，只需要极少量DNA即可，而且对1个碱基的差异都可以准确检测出来；本发明因为不涉及DNA抽提，对样本进行PCR以后经过简单的稀释、变性和毛细管电泳即可以检测分析，没有繁琐的步骤，所以适合大规模批量化操作。

公开(公告)号：CN107418974A

公开(公告)日：2017-12-01

申请号：CN201710632750.4

申请日：2017-07-28

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 卢燎勋 ,  张黎琛 ,  梁银明 ,  黄蓉 ,  晁天柱 ,  郑前前 ,  罗静 ,  谷妍蓉 ,  袁鹏

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90

CPC classification number: C12N15/85 ,  C07K14/47 ,  C07K14/4702 ,  C12N15/907 ,  C12N2810/10

Abstract: 本发明涉及一种利用单克隆细胞分选快速获得CRISPR/Cas9基因敲除稳定细胞株的方法，属于基因工程和遗传修饰技术领域。本发明将CRISPR/Cas9系统、流式细胞仪单细胞分选和表达载体上的荧光蛋白筛选三者结合起来，可以在短时间内获得阳性单克隆，极大地提高细胞系基因敲除工作效率。与传统细胞系基因敲除方法相比，本发明使用流式细胞仪进行单细胞分选，一方面省去了抗生素筛选的繁琐从而可以在非常短时间内获得大量单细胞，另外一方面可以保证每一个培养孔中都是单细胞，减少假阳性率；本发明在细胞转染以后40-80小时进行分选，此时间点可以保证细胞在分选以后具有最大存活率，进而提高筛选效率。