公开(公告)号：KR1020020017501A

公开(公告)日：2002-03-07

申请号：KR1020000050868

申请日：2000-08-30

Applicant: 한국과학기술원

Inventor： 이균민 ,  김노수 ,  홍효정

IPC: C12P21/08

Abstract: PURPOSE: Provided is a method for increasing humanized antibody production in CHO cells by overexpression of bcl-2 gene and treatment of sodium butyrate, thereby increasing unit production of animal cell products, such as humanized antibodies and cytokines. CONSTITUTION: The antibody production is increased by introducing a vector which overexpresses bcl-2 gene into CHO cells transformed with a gene encoding a humanized antibody to obtain a cell line having apoptosis resistance, then adding sodium butyrate. The method for increasing the production of humanized antibodies comprises the steps of: introducing a vector which overexpressing human bcl-1 gene into the recombinant CHO cells above; inoculating the recombinant CHO cells transformed with the vector to a medium; and adding sodium butyrate thereto.

Abstract translation: 目的：提供通过bcl-2基因的过表达增加CHO细胞中人源化抗体产生和治疗丁酸钠的方法，从而增加动物细胞产物如人源化抗体和细胞因子的单位生产。 构成：通过将过表达bcl-2基因的载体导入到用编码人源化抗体的基因转化的CHO细胞中，获得具有抗细胞凋亡的细胞系，然后加入丁酸钠，从而增加抗体产生。 增加人源化抗体生产的方法包括以下步骤：将过表达人bcl-1基因的载体导入上述重组CHO细胞; 将用载体转化的重组CHO细胞接种到培养基中; 并向其中加入丁酸钠。

公开(公告)号：KR102056075B1

公开(公告)日：2020-01-22

申请号：KR1020180065093

申请日：2018-06-05

Applicant: 한국과학기술원

Inventor： 이균민 ,  김채린

IPC: C12N5/00 ,  C07K14/475 ,  C07K14/495

公开(公告)号：KR101947869B1

公开(公告)日：2019-02-14

申请号：KR1020160119851

申请日：2016-09-20

Applicant: 재단법인 지능형 바이오 시스템 설계 및 합성 연구단 ,  한국과학기술원

Inventor： 조병관 ,  이남일 ,  신종오 ,  이균민 ,  박진형

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/65 ,  C12N15/86 ,  G16B30/00 ,  G01N15/14 ,  G01N15/00

公开(公告)号：KR101625595B1

公开(公告)日：2016-05-31

申请号：KR1020140052363

申请日：2014-04-30

Applicant: 한국과학기술원

Inventor： 이균민 ,  하태광

IPC: C12N5/02 ,  C12N5/07 ,  C12P21/00

Abstract: 본발명은고농도의재조합단백질을생산할수 있는세포배양용배지조성물에관한것으로, 구체적으로는염화리튬(LiCl)이첨가된배지를이용하여재조합단백질을발현하는유전자가형질감염된 CHO(Chinese hamster ovary) 세포주를배양한결과, 상기염화리튬이포함된배지는세포의비생산속도, 세포의생존율및 목적단백질의최대농도를증가시킴으로써치료용재조합단백질을생산하는데에유용하게이용될수 있다.

公开(公告)号：KR1020140131806A

公开(公告)日：2014-11-14

申请号：KR1020130050894

申请日：2013-05-06

Applicant: 한국과학기술원

Inventor： 이균민 ,  이재성

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/12 ,  C12N15/63 ,  C12N15/85

Abstract: 본 발명은 항예정사 유전자인 Bcl-2와 자식작용 경로 유전자인 Beclin-1을 동시에 과발현하도록 형질전환되고 dhfr(dihydrofolate reductase) 유전자가 결핍된 신규한 CHO 숙주 세포주 및 이의 제조 방법에 관한 것으로서, 본 발명의 형질전환된 CHO 세포주는 항예정사 단백질인 Bcl-2의 과발현으로 인한 세포예정사의 억제효과와 더불어 자식작용 경로 유전자인 Beclin-1의 과발현으로 인한 자식작용의 유도효과로 인해 더욱 효과적으로 세포사를 저해할 수 있으며, 이렇게 유도된 자식작용경로가 세포사를 저해할 수 있음을 확인하였고, 기존의 세포사 억제방법인 Bcl-2만을 과발현한 것보다 더욱 효과적으로 세포사를 저해함을 확인하였고, 외부 환경에 대한 스트레스로 유도되는 세포사를 억제함을 확인함으로써, 치료용 단백질을 생산에 유용하게 이용할 수 있다.

Abstract translation: 本发明涉及一种转化为同时过表达Bcl-2（其是抗凋亡基因）的新型CHO细胞系和作为自噬途径基因的Bclin-1，并且缺乏二氢叶酸还原酶（dhfr） 基因及其制备方法。 本发明的转基因CHO细胞系由于自噬途径基因Beclin-1的过度表达引起的自噬诱导作用以及由Bcl的过表达引起的细胞凋亡抑制作用，能够更有效地抑制细胞死亡 -2，它是一种抗凋亡蛋白。 与传统的抑制细胞死亡的方法Bcl-2的过表达相比，诱导的自噬途径可以抑制细胞死亡，抑制细胞死亡，并且抑制细胞死亡，并且抑制来自外部环境的应激引起的细胞死亡 ，因此新型CHO细胞系可用于治疗性蛋白质的制备。

公开(公告)号：KR1020120070075A

公开(公告)日：2012-06-29

申请号：KR1020100131477

申请日：2010-12-21

Applicant: 한국과학기술원

Inventor： 이균민 ,  전민경

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/12 ,  C12N15/53 ,  C12N15/85

Abstract: PURPOSE: A method for producing target proteins using transformed CHO cell line is provided to enhance cell survival ability and to reduce accumulation of lactic acid. CONSTITUTION: A transformed CHO cell line is transformed to overexpress Bcl2 protein and underexpress LDH-A. The transformed CHO cell line is deposited by deposit number KCTC 11819BP. A method for preparing the transformed CHO cell line comprises: a step of introducing a vector containing Bcl2 gene into DHFR(-) host cells and selecting Bcl2-overexpressing host cells; a step of introducing a vector which expresses shRNA to the Bcl2-overexpression host cells and selecting the host cells which underexpresses LDH-A proteins; and a step of culturing the host cells in a serum-free medium. The host cells are CHO, VERO, BHK, HeLa, Cv1, MDCK, 293, 3T3, myeloma, PC12 or WI38.

Abstract translation: 目的：提供使用转化的CHO细胞系产生靶蛋白的方法，以增强细胞存活能力并减少乳酸的积累。 构成：转化的CHO细胞系被转化为过表达Bcl2蛋白，并低表达LDH-A。 转化的CHO细胞系通过保藏号KCTC 11819BP沉积。 制备转化的CHO细胞系的方法包括：将含有Bcl2基因的载体导入DHFR（ - ）宿主细胞并选择Bcl2过表达宿主细胞的步骤; 将表达shRNA的载体引入Bcl2过表达宿主细胞并选择不表达LDH-A蛋白的宿主细胞的步骤; 以及在无血清培养基中培养宿主细胞的步骤。 宿主细胞是CHO，VERO，BHK，HeLa，Cv1，MDCK，293,3T3，骨髓瘤，PC12或WI38。

公开(公告)号：KR100476347B1

公开(公告)日：2005-03-16

申请号：KR1020020059503

申请日：2002-09-30

Applicant: 한국과학기술원

Inventor： 이균민 ,  황선옥 ,  정주영

IPC: C12N15/85

CPC classification number: C07K14/524 ,  C12P21/02

Abstract: 본 발명은 테트라사이클린에 의한 샤페론 단백질의 발현량 조절을 통해 목적 단백질을 대량으로 생산하는 방법에 관한 것으로서, 구체적으로는 테트라사이클린에 반응하는 유전자 및 ERp57 또는 CRT/CNX 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 발현벡터, 상기 발현벡터를 목적 단백질을 생산하는 세포에 도입한 형질전환체 및 상기 형질전환체를 테트라사이클린의 농도를 달리해 배양하여 목적 단백질을 대량으로 생산하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 테트라사이클린에 의해 샤페론 단백질의 발현량을 조절하는 벡터를 도입한 동물 세포는 목적 단백질을 신속하게 분비하고 대량으로 생산할 수 있어 재조합단백질을 이용한 의약품의 생산 공정에 유용하게 사용될 수 있다.

公开(公告)号：KR100454016B1

公开(公告)日：2004-10-26

申请号：KR1020020000603

申请日：2002-01-05

Applicant: 한국과학기술원

Inventor： 이균민 ,  이석규

IPC: C12N5/16

CPC classification number: C12P21/02 ,  C07K14/4747 ,  C12N2510/00 ,  C12N2510/02

Abstract: A DHFR-deficient CHO cell line is transfected with anti-apoptotic gene, a method prepares the DHFR-deficient CHO cell line, and a method produces target proteins using the DHFR-deficient CHO cell line. Protein production using animal cells is limited by the low productivity of animal cells compared to microbial cells. Therefore, inhibition of apoptosis is expected to increase in productivity of target proteins by extending longevity of the transfected CHO cell line and to maintain the molecular integrity of unstable target proteins in a medium by decreasing cell lysis.

Abstract translation: DHFR缺陷型CHO细胞系用抗凋亡基因转染，一种方法制备DHFR缺陷型CHO细胞系，一种方法使用DHFR缺陷型CHO细胞系产生目标蛋白质。 与微生物细胞相比，使用动物细胞的蛋白质生产受到动物细胞生产力低的限制。 因此，通过延长转染的CHO细胞系的寿命，预期抑制凋亡可增加靶蛋白质的生产力，并通过减少细胞裂解来维持培养基中不稳定靶蛋白的分子完整性。

公开(公告)号：KR1020040028348A

公开(公告)日：2004-04-03

申请号：KR1020020059503

申请日：2002-09-30

Applicant: 한국과학기술원

Inventor： 이균민 ,  황선옥 ,  정주영

IPC: C12N15/85

CPC classification number: C07K14/524 ,  C12P21/02

Abstract: PURPOSE: A method for mass-production of a target protein by regulating the expression of chaperone protein is provided, thereby rapidly mass-producing the target protein by inserting a vector regulating the expression of chaperone protein by tetracycline into the animal cell. CONSTITUTION: A method for mass-production of a target protein comprises the steps of: constructing an expression vector(KCTC 10345BP) containing tetracycline response gene and chaperone protein gene ERp57 or CRT/CNX protein gene; transforming a cell of which gene expression is regulated by tetracycline, producing a target protein with the expression vector(KCTC 10345NP); and culturing the transformed cell in media, each containing different concentration of tetracycline, wherein the target protein is thrombopoietin(TPO); and the expression of chaperone protein is increased by reduction of tetracycline.

Abstract translation: 目的：提供通过调节伴侣蛋白的表达来大规模生产靶蛋白的方法，从而通过将调节四环素分子伴侣蛋白的表达的载体插入动物细胞来快速大规模生产靶蛋白。 构成：大规模生产靶蛋白的方法包括以下步骤：构建含有四环素应答基因和伴侣蛋白基因ERp57或CRT / CNX蛋白基因的表达载体（KCTC 10345BP）; 转化基因表达受四环素调控的细胞，用表达载体（KCTC 10345NP）产生靶蛋白; 并培养含有不同浓度的四环素的介质中的转化细胞，其中靶蛋白是血小板生成素（TPO）; 并且伴侣蛋白的表达通过减少四环素而增加。

公开(公告)号：KR100279553B1

公开(公告)日：2001-04-02

申请号：KR1019980056432

申请日：1998-12-19

Applicant: 한국과학기술원

Inventor： 이균민 ,  류준수

IPC: C12N1/00

Abstract: 본 발명은 저삼투압 배지를 이용한 하이브리도마(hybridoma) 동물세포의 유가배양에 의해 단일군 항체(monoclonal antibody)를 고농도로 생산하는 방법에 관한 것이다. 좀 더 구체적으로, 본 발명은 하이브리도마 세포로부터 단일군 항체를 생산할 때, 저삼투압 배지를 유가배양의 출발배지로 사용하고 무염·무혈청의 전기 배지 농축분을 유가성분으로 사용함으로써, 배지 농축분의 첨가시 관찰되는 삼투압의 급등에 의한 세포성장의 저해를 완화하여 항체 생산성을 크게 증진시킬 수 있는 단일군 항체의 생산방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법에 의하면, 유가배양에서 배지 농축분의 첨가시 나타나는 삼투압의 증가가 완화되어, 하이브리도마 세포가 생존할 수 있는 기간이 연장됨으로써, 종래의 정상삼투압 배지에서의 회분배양이나 유가배양에 비해 월등히 높은 고농도의 단일군 항체를 생산한다.