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公开(公告)号：CN112094862B
公开(公告)日：2022-04-19
申请号：CN201911304475.9
申请日：2019-12-17
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种带有标记的棉花雄性不育系的创制方法。本发明提供利用CRISPR‑Cas9系统创造带有新型标记的棉花雄性不育系。本发明的特征在于，选取特异针对GhEMS1基因的靶位点sgRNA1、sgRNA2，与Cas9蛋白在棉花内稳定表达，获得带有新型标记的棉花雄性不育系。转基因再生植株的花药表面带有黑斑表型可稳定地遗传至下一代，且不育性稳定。本发明的优点在于克服了传统人工去雄方法做杂交费时费力的缺陷，并且不育株带有黑斑标记，便于早期确定不育株。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109321576A
公开(公告)日：2019-02-12
申请号：CN201811271189.2
申请日：2018-10-29
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/60
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种无腺体低棉酚棉花种质的创制方法。本发明提供利用CRISPR-Cas9系统创造无腺体低棉酚棉花材料的方法。选取特异针对控制棉花腺体发育形成GPGF基因的靶位点sgRNA1、sgRNA2，与Cas9蛋白在棉花内稳定表达，获得无腺体低棉酚棉花。转基因再生植株的无腺体表型可稳定遗传至下一代，且棉酚含量下降明显。该发明的优点在于克服了传统杂交方法创造低酚棉种质资源时间长和不稳定的缺陷，并且不限于棉花的受体品种。
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公开(公告)号：CN108203714B
公开(公告)日：2021-03-02
申请号：CN201611188402.4
申请日：2016-12-20
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/82 , C12N15/66 , C12N15/113
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种棉花基因的编辑方法。公开了用于棉花基因组编辑的CRISPR‑Cas9系统及其构建方法。本发明克隆得到两个陆地棉U6启动子pGhU6‑7和pGhU6‑9，并突变了Bsa Ⅰ酶切位点。利用优化后的启动子构建了在棉花中具有编辑能力的CRISPR‑Cas9载体的两个载体pRGEB32‑GhU6.7‑NPT Ⅱ、pRGEB32‑GhU6.9‑NPT Ⅱ。选取1个棉花内源基因GhCLA为目标基因，设计四个靶向该基因的sgRNA，引导Cas9蛋白在GhCLA的特异位点进行切割。通过棉花的白化表型、酶切图、测序验证，表明pGhU6‑7I和pGhU6‑9I驱动的CRISPR‑Cas9基因编辑系统在棉花内具有编辑能力。
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公开(公告)号：CN112094862A
公开(公告)日：2020-12-18
申请号：CN201911304475.9
申请日：2019-12-17
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种带有标记的棉花雄性不育系的创制方法。本发明提供利用CRISPR‑Cas9系统创造带有新型标记的棉花雄性不育系。本发明的特征在于，选取特异针对GhEMS1基因的靶位点sgRNA1、sgRNA2，与Cas9蛋白在棉花内稳定表达，获得带有新型标记的棉花雄性不育系。转基因再生植株的花药表面带有黑斑表型可稳定地遗传至下一代，且不育性稳定。本发明的优点在于克服了传统人工去雄方法做杂交费时费力的缺陷，并且不育株带有黑斑标记，便于早期确定不育株。
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公开(公告)号：CN109517846A
公开(公告)日：2019-03-26
申请号：CN201811393902.0
申请日：2018-11-21
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及基于CRISPR/Cas9系统高通量构建棉花突变体库的方法。本发明构建了一个陆地棉的转化载体，利用这个载体在陆地棉基因组中进行高通量编辑的应用。本发明通过带有接头的引物克隆得到tRNA和CcdB基因片段，将这些基因片段连接至适用于陆地棉基因组编辑的pRGEB32-GhU6.7-NPTⅡ转化载体中成为一种可以高通量编辑棉花基因组的载体Htkt。本发明利用高通量转化载体的特点，可大批量设计陆地棉靶标片段并进行混合构建载体最终得到棉花突变体库。高通量测序结果表明，这种高通量载体的sgRNA覆盖率高达97％。
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公开(公告)号：CN108203714A
公开(公告)日：2018-06-26
申请号：CN201611188402.4
申请日：2016-12-20
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/82 , C12N15/66 , C12N15/113
CPC classification number: C12N15/8205 , C12N9/1247 , C12N15/66 , C12Y207/07006
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种棉花基因的编辑方法。公开了用于棉花基因组编辑的CRISPR‑Cas9系统及其构建方法。本发明克隆得到两个陆地棉U6启动子pGhU6‑7和pGhU6‑9，并突变了Bsa Ⅰ酶切位点。利用优化后的启动子构建了在棉花中具有编辑能力的CRISPR‑Cas9载体的两个载体pRGEB32‑GhU6.7‑NPT Ⅱ、pRGEB32‑GhU6.9‑NPT Ⅱ。选取1个棉花内源基因GhCLA为目标基因，设计四个靶向该基因的sgRNA，引导Cas9蛋白在GhCLA的特异位点进行切割。通过棉花的白化表型、酶切图、测序验证，表明pGhU6‑7I和pGhU6‑9I驱动的CRISPR‑Cas9基因编辑系统在棉花内具有编辑能力。
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