公开(公告)号：CN107058387B

公开(公告)日：2019-09-06

申请号：CN201710240457.3

申请日：2017-04-13

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 王天云 ,  林艳 ,  井长勤 ,  李琴 ,  王建华 ,  郭梦龙

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明涉及一种适合HEK293细胞的双顺反子表达载体及其制备方法、表达系统、应用，属于基因工程技术领域。本发明的适合HEK293细胞的双顺反子表达载体，包含如下元件：第一核基质结合区序列‑启动子‑目的基因‑内部核糖体进入位点序列‑筛选标记基因‑Poly A–第二核基质结合区序列。该载体利用优化的MAR序列可以显著提高HEK293细胞转基因表达，克服转基因沉默，实现转基因在宿主细胞中的高效、长期表达。同时可实现目的基因和筛选标记的同时表达，可减少由于不同表达框存在导致的假阳性细胞克隆，提高阳性细胞克隆筛选率，并克服传统载体目的基因与筛选标记基因表达不均衡的问题。

公开(公告)号：CN109468311B

公开(公告)日：2021-08-24

申请号：CN201811427952.6

申请日：2018-11-27

Applicant: 河南普诺易生物制品研究院有限公司 ,  新乡医学院

Inventor： 郭潇 ,  王天云 ,  窦媛媛 ,  杨献军 ,  王建华

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明涉及一种提取质粒DNA的菌体裂解液、试剂盒及提取质粒DNA的方法，属于生物技术领域。本发明提取质粒DNA的菌体裂解液由裂解缓冲液、溶菌酶、RNase A组成，裂解缓冲液的组成为：每100mL裂解缓冲液中含有1.5～10g蔗糖、0.7～2.2g乙二胺四乙酸二钠、0.3～0.9g三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐、2.7～5.4g NH4Cl、0.1～2.0mL 0.5％的Triton X‑100、0.2～0.6g CaCl2、0.5～8g盐酸胍、0.5～3g异硫氰酸胍，其余量为水。本发明提取质粒DNA的试剂盒，包括上述菌体裂解液、漂洗液和洗脱液。该试剂盒成本低、提取质粒纯度高、适用性好。

公开(公告)号：CN109468311A

公开(公告)日：2019-03-15

申请号：CN201811427952.6

申请日：2018-11-27

Applicant: 河南普诺易生物制品研究院有限公司 ,  新乡医学院

Inventor： 郭潇 ,  王天云 ,  窦媛媛 ,  杨献军 ,  王建华

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明涉及一种提取质粒DNA的菌体裂解液、试剂盒及提取质粒DNA的方法，属于生物技术领域。本发明提取质粒DNA的菌体裂解液由裂解缓冲液、溶菌酶、RNase A组成，裂解缓冲液的组成为：每100mL裂解缓冲液中含有1.5～10g蔗糖、0.7～2.2g乙二胺四乙酸二钠、0.3～0.9g三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐、2.7～5.4g NH4Cl、0.1～2.0mL 0.5％的Triton X-100、0.2～0.6g CaCl2、0.5～8g盐酸胍、0.5～3g异硫氰酸胍，其余量为水。本发明提取质粒DNA的试剂盒，包括上述菌体裂解液、漂洗液和洗脱液。该试剂盒成本低、提取质粒纯度高、适用性好。

公开(公告)号：CN109468412A

公开(公告)日：2019-03-15

申请号：CN201811534929.7

申请日：2018-12-14

Applicant: 河南普诺易生物制品研究院有限公司 ,  新乡医学院

Inventor： 林重超 ,  王建华 ,  王天云 ,  郭潇 ,  杨献军 ,  王燕芳

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及一种检测CHO细胞中Vesivirus 2117病毒污染的引物、试剂盒及方法，属于生物医药技术领域。本发明的检测Vesivirus 2117病毒的实时荧光定量PCR引物序列为：正向引物：5′-ACGTTGACGATAGGGGGAGA-3′；反向引物：5′-CTTTGGCAAAGACCCCGTTG-3′；试剂盒还包括阳性质控品和内参管家基因GAPDH引物序列，其引物序列为：正向引物：5′-CCCATGGCAAGTTCAAAGGCA-3′；反向引物：5′-TGGTGAAGACGCCAGTAGATT-3′。本发明的试剂盒具有高灵敏度、高特异性、高效率高的特点，且操作简单，节约时间。

公开(公告)号：CN107058387A

公开(公告)日：2017-08-18

申请号：CN201710240457.3

申请日：2017-04-13

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 王天云 ,  林艳 ,  井长勤 ,  李琴 ,  王建华 ,  郭梦龙

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明涉及一种适合HEK293细胞的双顺反子表达载体及其制备方法、表达系统、应用，属于基因工程技术领域。本发明的适合HEK293细胞的双顺反子表达载体，包含如下元件：第一核基质结合区序列‑启动子‑目的基因‑内部核糖体进入位点序列‑筛选标记基因‑Poly A–第二核基质结合区序列。该载体利用优化的MAR序列可以显著提高HEK293细胞转基因表达，克服转基因沉默，实现转基因在宿主细胞中的高效、长期表达。同时可实现目的基因和筛选标记的同时表达，可减少由于不同表达框存在导致的假阳性细胞克隆，提高阳性细胞克隆筛选率，并克服传统载体目的基因与筛选标记基因表达不均衡的问题。