公开(公告)号：CN101942475A

公开(公告)日：2011-01-12

申请号：CN201010106639.X

申请日：2010-02-05

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 王天云 ,  王小引 ,  石如玲 ,  董玉珍 ,  杨磊 ,  韩忠敏 ,  张靖 ,  林艳

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  A61K48/00

Abstract: 本发明涉及一种微环游离表达载体及其构建方法和应用，该载体含有噬菌体整合酶基因、I-SceI基因及酶切位点、人源性的MAR序列及attB和attP位点；其构建方法是首先构建含整合酶基因和I-SceI基因的载体pET-及含人源性的MAR序列的载体pcDNAM，然后将pcDNAM载体上的目的片段再克隆到pET-载体中构建成微环游离表达载体pEMW；其应用体现在基因治疗及基因工程方面。本发明的载体能在宿主菌内完成微环载体的重组过程，消除原核质粒元件；还可游离于宿主细胞基因组DNA之外稳定持久的表达外源基因；利用本发明的表达载体可以成功地在各种人类及动物细胞中高效表达外源基因。

公开(公告)号：CN101942475B

公开(公告)日：2013-01-02

申请号：CN201010106639.X

申请日：2010-02-05

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 王天云 ,  王小引 ,  刘中和 ,  石如玲 ,  杨磊 ,  董玉珍 ,  韩忠敏 ,  张靖 ,  林艳

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  A61K48/00

Abstract: 本发明涉及一种微环游离表达载体及其构建方法和应用，该载体含有噬菌体整合酶基因、I-SceI基因及酶切位点、人源性的MAR序列及attB和attP位点；其构建方法是首先构建含整合酶基因和I-SceI基因的载体pET-及含人源性的MAR序列的载体pcDNAM，然后将pcDNAM载体上的目的片段再克隆到pET-载体中构建成微环游离表达载体pEMW；其应用体现在基因治疗及基因工程方面。本发明的载体能在宿主菌内完成微环载体的重组过程，消除原核质粒元件；还可游离于宿主细胞基因组DNA之外稳定持久的表达外源基因；利用本发明的表达载体可以成功地在各种人类及动物细胞中高效表达外源基因。