公开(公告)号：CN119913205A

公开(公告)日：2025-05-02

申请号：CN202510173089.X

申请日：2025-02-17

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 乔梁 ,  林俊堂 ,  高格 ,  闫欣 ,  康静 ,  尚晓迪 ,  许晓如 ,  张佩琪 ,  管丽红 ,  李小英 ,  杨慈清

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/55 ,  C12N5/10 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9构建Ago2基因敲除BV2细胞系的方法及应用，使用在线工具CRISPOR在小鼠Ago2基因exon4和exon11的上下游各设计及合成1个sgRNA，然后将其电转入BV2细胞系，经单克隆细胞筛选、PCR鉴定和Sanger测序鉴定获得Ago2基因敲除BV2细胞系，最后使用Western blot检测Ago2蛋白表达验证BV2细胞系中Ago2基因的敲除效果。本发明成功构建的Ago2基因敲除BV2细胞系为研究Ago2基因功能、药物研发及Lessel‑Kreienkamp综合征疾病机制等研究提供有利工具。

公开(公告)号：CN119506350A

公开(公告)日：2025-02-25

申请号：CN202411657377.4

申请日：2024-11-19

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 尚晓迪 ,  林俊堂 ,  邵肖楠 ,  乔梁 ,  闫欣 ,  康静 ,  高格 ,  管丽红 ,  杨慈清 ,  李小英

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N15/87 ,  C12Q1/02 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了Trem2基因过表达和敲除的BV2细胞系构建方法及应用，首先基于转座子系统构建Trem2基因过表达的BV2细胞系，具体方法包括：（1）载体构建；（2）细胞转染；（3）稳转细胞株扩增；（4）稳转细胞株验证，最终成功构建Trem2基因过表达的BV2细胞系。其次基于CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Trem2基因敲除的BV2细胞系，具体方法包括：（1）靶点设计及载体构建；（2）细胞转染；（3）单克隆筛选；（4）敲除细胞系验证，最终成功构建Trem2基因敲除的BV2细胞系。本发明建立的Trem2基因过表达和敲除的BV2细胞系为靶向Trem2治疗中枢神经系统疾病提供有利工具。