公开(公告)号：KR1020120077182A

公开(公告)日：2012-07-10

申请号：KR1020100139050

申请日：2010-12-30

Applicant: 서울대학교산학협력단

Inventor： 김선영 ,  윤기정

IPC: C12N15/89 ,  C12N15/867 ,  A01K67/027

Abstract: PURPOSE: A method for producing a transgenic animal by ultrasound image-guided gene delivery(UIGD) technique is provided to specifically express a target protein in brain cells. CONSTITUTION: A method for producing a transgenic animal comprises: a step of preparing a retrovirus; a step of preparing retrovirus particles using the recombinant retrovirus vector, vescular stomatitis virus(VSV-G) glycoprotein expression vescular stomatitis virus(VSV-G) glycoprotein expression vector; a step of exposing the uterus of a mammal except for human by ultrasonic wave; a step of microinjecting the retrovirus particles to ventricle site of an embryo by an ultrasound image; and a step of developing the embryo.

Abstract translation: 目的：提供通过超声图像引导基因递送（UIGD）技术生产转基因动物的方法，以特异性表达脑细胞中的靶蛋白。 构成：生产转基因动物的方法包括：制备逆转录病毒的步骤; 使用重组逆转录病毒载体，vescular口炎病毒（VSV-G）糖蛋白表达囊状口炎病毒（VSV-G）糖蛋白表达载体制备逆转录病毒颗粒的步骤; 通过超声波暴露除人之外的哺乳动物子宫的步骤; 通过超声图像将逆转录病毒颗粒显微注射到胚胎的心室位置的步骤; 并开发胚胎的步骤。

公开(公告)号：KR101250991B1

公开(公告)日：2013-04-04

申请号：KR1020100139052

申请日：2010-12-30

Applicant: 서울대학교산학협력단 ,  성균관대학교산학협력단

Inventor： 김선영 ,  윤기정 ,  장지원

IPC: C12N15/89 ,  C12N15/861 ,  A01K67/027

Abstract: 본 발명은 초음파 영상 기반의 유전자 전달(Ultrasound Image-guided Gene Delivery, UIGD) 기술 및 아데노바이러스 벡터를 이용한 형질전환 동물의 제조방법에 관한 것으로서, 구체적으로 초음파 영상을 기반으로 유전자를 전달함으로써 ED 8.5 내지 9.5일의 초기 발생 단계의 마우스 배아의 뇌실에 유전자를 주입할 수 있고, 아데노바이러스를 마우스 배아의 뇌실에 주입함으로써, 목적 단백질이 초기 발생 단계의 마우스 배아의 뇌세포에서 안정적으로 발현됨을 확인하였으므로, 최적화된 UIGD 기술 및 아데노바이러스 유래의 유전자 전달체는 목적 단백질이 뇌세포 특이적으로 발현하는 형질전환 동물의 제조에 유용하게 이용할 수 있다.

公开(公告)号：KR1020120077184A

公开(公告)日：2012-07-10

申请号：KR1020100139052

申请日：2010-12-30

Applicant: 서울대학교산학협력단 ,  성균관대학교산학협력단

Inventor： 김선영 ,  윤기정 ,  장지원

IPC: C12N15/89 ,  C12N15/861 ,  A01K67/027

Abstract: PURPOSE: A method for producing a transgenic animal by UIGD(ultrasound image-guided gene delivery) technique and adenovirus vector is provided to stably express a target protein in brain cells of an mouse embryo. CONSTITUTION: A method for producing a transgenic animal which specifically expresses a target protein in brain cells comprises: a step of preparing a recombinant adenovirus vector containing a promoter and a gene which is operatively linked and encodes target proteins; a step of transfecting the recombinant adenovirus vector to adenovirus-producing cell line to prepare a recombinant adenovirus particles; and a step of exposing uterus of mammalian mother with ultrasonic wave to microinjection of the recombinant adenovirus particles to embryonic ventricle.

Abstract translation: 目的：提供通过UIGD（超声图像引导基因递送）技术和腺病毒载体产生转基因动物的方法，以稳定表达小鼠胚胎脑细胞中的靶蛋白。 构成：在脑细胞中特异性表达靶蛋白质的转基因动物的制造方法包括：制备含有启动子和可操作地连接并编码靶蛋白的基因的重组腺病毒载体的步骤; 将重组腺病毒载体转染至产生腺病毒的细胞系以制备重组腺病毒颗粒的步骤; 以及用超声波将哺乳动物母亲的子宫暴露于胚胎脑室的显微注射重组腺病毒颗粒的步骤。

公开(公告)号：KR101242114B1

公开(公告)日：2013-03-11

申请号：KR1020100139051

申请日：2010-12-30

Applicant: 서울대학교산학협력단 ,  성균관대학교산학협력단

Inventor： 김선영 ,  윤기정 ,  장지원

IPC: C12N15/89 ,  C12N15/867 ,  A01K67/027 ,  C12Q1/68

Abstract: 본 발명은 초음파 영상 기반의 유전자 전달(Ultrasound Image-guided Gene Delivery, UIGD) 기술을 이용한 형질전환 동물의 선별 방법에 관한 것으로서, 구체적으로 초음파 영상을 기반으로 유전자를 전달함으로써 ED 8.5 내지 9.5일의 초기 발생 단계의 마우스 배아의 뇌실에 유전자를 주입할 수 있고, 마우스 백혈병 바이러스(Murine Leukemia Virus, MLV) 기반 레트로바이러스 벡터, 또는 이의 3'LTR이 마우스 줄기세포 바이러스(Murine Stem Cell Virus, MSCV)의 3'LTR로 치환된 레트로바이러스 벡터는 바이러스 역가가 향상되어 고농도로 생산 가능하며, MLV 또는 MSCV의 3'LTR을 사용하고 목적 단백질 및 리포터 유전자가 포함된 레트로바이러스 벡터와 함께, 수포성 구내염 바이러스-G(vescular stomatitis virus, VSV-G) 단백질을 외피 단백질로서 사용하여 제조한 레트로바이러스를 마우스 배아의 뇌실에 주입함으로써, 상기 목적 단백질이 초기 발생 단계의 마우스 배아 및 성체의 뇌세포에서 안정적으로 발현됨을 확인하였고, 한편, 목적 유전자를 포함하는 재조합 아데노바이러스를 마우스 배아의 뇌실에 주입하여, 상기 목적 단백질이 마우스 배아의 뇌세포에서 발현됨을 확인하였다. 이러한 유전자 전달 기술에 있어서 리포터 유전자를 함께 전달하여 그 발현을 확인함으로써 살아있는 상태에서도 목적 유전자가 전달된 형질전환 동물을 간편하게 구별하였으므로, 최적화된 UIGD 기술 및 리포터 유전자를 포함하는 레트로바이러스 또는 아데노바이러스 유래의 유전자 전달체는 목적 단백질이 뇌세포 특이적으로 발현하는 형질전환 동물의 선별에 유용하게 이용할 수 있다.

公开(公告)号：KR1020130020222A

公开(公告)日：2013-02-27

申请号：KR1020110082718

申请日：2011-08-19

Applicant: 서울대학교산학협력단

Inventor： 김선영 ,  장지원 ,  윤기정

IPC: C12N15/867 ,  C12N5/10 ,  A01K67/027

Abstract: PURPOSE: A method for neural cell type-specific expression of a target gene is provided to effectively and specifically express the target gene and to study a gene in a neural cell. CONSTITUTION: A method for neural cell type-specific expression of a target gene comprises: a step of preparing a viral vector containing a neural cell type-specific promoter and a target gene which is operatively linked to the promoter; a step of injecting the prepared viral vector into the cerebral ventricle of an animal embryo using UIGD(Ultrasound Image-Guided Gene Delivery); a step of developing the embryo and obtaining the neural cell with a neural cell type-specific expression pattern. The neural cell type-specific promoter is a neuron-, astrocyte- , or oligodendrocyte-specific promoter. The viral vector is retrovirus.

Abstract translation: 目的：提供靶基因的神经细胞类型特异性表达的方法，以有效和特异性表达靶基因并研究神经细胞中的基因。 构成：靶基因的神经细胞类型特异性表达的方法包括：制备含有神经细胞型特异性启动子和可操作地连接于启动子的靶基因的病毒载体的步骤; 使用UIGD（Ultrasound Image-Guided Gene Delivery）将制备的病毒载体注射到动物胚胎的脑室中的步骤; 开发胚胎并用神经细胞类型特异性表达模式获得神经细胞的步骤。 神经细胞类型特异性启动子是神经元，星形胶质细胞或少突胶质细胞特异性启动子。 病毒载体是逆转录病毒。

公开(公告)号：KR1020120077183A

公开(公告)日：2012-07-10

申请号：KR1020100139051

申请日：2010-12-30

Applicant: 서울대학교산학협력단 ,  성균관대학교산학협력단

Inventor： 김선영 ,  윤기정 ,  장지원

IPC: C12N15/89 ,  C12N15/867 ,  A01K67/027 ,  C12Q1/68

CPC classification number: C12N15/89 ,  A01K67/0275 ,  C12N15/867 ,  C12Q1/6897

Abstract: PURPOSE: A method for selecting a transgenic animal using UIGD(ultrasound image-guided gene delivery) technique is provided to simply distinguish a target gene-delivered animal. CONSTITUTION: A method for selecting a transgenic animal in which target proteins are specifically expressed in brain cells comprises: a step of preparing a recombinant retrovirus vector containing one or more genes encoding target proteins and reporter gene; a step of preparing the retrovirus particles using vescular stomatitis virus(VSV-G) glycoprotein expression vector and recombinant retrovirus vector; a step of exposing the uterus by ultrasonic wave and performing microinjection of the retrovirus particles to embryonic ventricle; a step of developing the microinjected embryo; and a step of selecting an individual expressing a reporter gene in the embryo or adult body.

Abstract translation: 目的：提供使用UIGD（超声图像引导基因递送）技术选择转基因动物的方法，以简单区分靶基因递送的动物。 构成：选择目标蛋白质在脑细胞中特异性表达的转基因动物的方法包括：制备含有一个或多个编码靶蛋白和报道基因的基因的重组逆转录病毒载体的步骤; 使用囊状口炎病毒（VSV-G）糖蛋白表达载体和重组逆转录病毒载体制备逆转录病毒颗粒的步骤; 通过超声波暴露子宫并将逆转录病毒颗粒显微注射到胚胎心室的步骤; 开发微注射胚胎的步骤; 以及选择在胚胎或成体中表达报告基因的个体的步骤。

公开(公告)号：KR101290799B1

公开(公告)日：2013-07-29

申请号：KR1020110082718

申请日：2011-08-19

Applicant: 서울대학교산학협력단

Inventor： 김선영 ,  장지원 ,  윤기정

IPC: C12N15/867 ,  C12N5/10 ,  A01K67/027

Abstract: 본 발명은 목적 유전자의 신경세포(neural cell) 타입-특이적 발현 방법 및 이를 이용한 동물 모델에 관한 것이다. 본 발명은 목적 유전자를 효과적으로 신경세포(neural cell) 타입-특이적 발현하는 방법을 제공한다. 또한, 목적 유전자의 신경세포(neural cell) 타입-특이적 발현 양상을 나타내는 동물모델을 얻기 위한 비용 절감적이고 보다 효율적인 제조방법을 제공함으로써, 신경세포에서 유전자 연구에 유용하게 이용될 수 있다.

公开(公告)号：KR101257002B1

公开(公告)日：2013-04-26

申请号：KR1020100139050

申请日：2010-12-30

Applicant: 서울대학교산학협력단

Inventor： 김선영 ,  윤기정

IPC: C12N15/89 ,  C12N15/867 ,  A01K67/027

Abstract: 본 발명은 초음파 영상 기반의 유전자 전달(Ultrasound Image-guided Gene Delivery, UIGD) 기술을 이용한 형질전환 동물의 제조방법에 관한 것으로서, 구체적으로 초음파 영상을 기반으로 유전자를 전달함으로써 E8.5 내지 E9.5의 초기 발생 단계의 마우스 배아의 뇌실에 유전자를 주입할 수 있고, 마우스 백혈병 바이러스(Murine Leukemia Virus, MLV) 기반 레트로바이러스 벡터, 또는 이의 3'LTR이 마우스 줄기세포 바이러스(Murine Stem Cell Virus, MSCV)의 3'LTR로 치환된 레트로바이러스 벡터는 바이러스 역가가 향상되어 고농도로 생산 가능하며, 목적 단백질을 코딩하는 유전자 및 MSCV 3'LTR을 갖는 MLV 기반 레트로바이러스 벡터와, 수포성 구내염 바이러스-G(vescular stomatitis virus, VSV-G) 단백질을 외피 단백질로서 사용하여 제조한 레트로바이러스를 마우스 배아의 뇌실에 주입함으로써, 목적 단백질이 초기 발생 단계의 마우스 배아 및 성체의 뇌세포에서 안정적으로 발현됨을 확인하였으므로, 최적화된 UIGD 기술 및 유전자 전달체는 목적 단백질이 뇌세포 특이적으로 발현하는 형질전환 동물의 제조에 유용하게 이용할 수 있다.