Abstract:
본 발명은 천연재료인 쪽 식물에 포함되어 있는 인디칸(indican)에 작용하여 염료와 의약품 원료, 생리활성 물질로 이용되는 인디루빈(indirubin)의 생산 방법에 관한 것으로 베타-글루코시다아제(β-glucosidase)와 이사틴 생성 효소를 코딩하는 유전자를 포함하는 형질전환 미생물로 인디루빈를 특이적으로 대량 생산할 수 있는 방법을 제공하는 것이다. 더욱 상세하게는, 본 발명은 인디루빈의 제조 과정 중 인독실의 C-2 위치에 선택적으로 산화활성을 나타내는 옥시게나아제의 발굴 및 그 개량방법에 관한 것으로, 생물정보학적 방법으로 GenBank 에 등록된 서열에서 관련 유전자를 탐색/발굴한 후 발현벡터에 삽입해 형질전환시킨 재조합 균주를 ampicillin 과 인디칸이 포함된 LB 고체배지에 도말해 붉은색을 띄는 클론을 확보하는 과정을 거쳐 선발된 기능성 옥시게나아제 및 그 제조방법을 제공하는 것이다. 또한 발굴된 옥시게나아제의 활성증대를 위해 무작위 돌연변이법으로 제작된 재조합 유전자를 글루코시다아제가 포함된 재조합 균주에 형질전환한 후 대조군에 비해 인디루빈 생성능이 증가된 유전자가 삽입된 클론을 확보하는 과정으로 개량된 유전자원을 이용하는 인디루빈 제조 방법을 제공하는 것이다. 옥시게나아제, 글루코시다아제, 인디칸, 인독실, 이사탄, 인디루빈
Abstract:
PURPOSE: A transformed microorganism containing a gene encoding β-glucosidase or a method for producing indigo dye using the same is provided to ensure eco-friendly production and overcome problems of high cost and reproducibility. CONSTITUTION: A transformed microorganism containing a gene encoding β-glucosidase of sequences of the sequence number 1-8. The gene encodes β-glucosidase from a woad plant or its extract. A recombinant plasmid contains the gene and is expressed to maltose binding protein (MBP) fusion protein. A transformed microorganism E. coli XL1-BLUE[pTrc99A-glu(SM)] produces β-glucosidase from woad plant or its extract.
Abstract:
PURPOSE: A method for producing a large amount of indirubin using transformed microorganism is provided to be directly applied to the human body. CONSTITUTION: An indirubin or indirubin derivative is prepared from culture liquid containing a reaction substrate of an indicant or indoxyl derivative. A method for preparing indirubin comprises: a step of isolating and amplifying oxygenase gene which oxidizes C-2 position of indoxyl; and a step of culturing recombinant E.coli transformed by a vector to E.coli.
Abstract:
본 발명은 천연재료인 쪽식물에 포함되어 있는 인디칸 혹은 그 유도체에 작용하여 염료와 의약품 원료로 이용되는 인디고 블루와 인디루비딘 제조에 유용한 핵심 효소인 β-글리코시다아제(β-glucosidase)를 코딩하는 유전자를 포함하는 형질전환 미생물 및 그를 이용한 인디고 염료의 생산 방법에 관한 것이다. 본 발명에 의하면 쪽 식물을 이용한 천연 염료의 생산, 화장품이나 물감 등 다양한 분야에서 활용할 수 있을 것으로 기대된다. 또한 제조공정이 친환경적이고 천연재료를 이용함으로 면역, 항균작용과 관련한 의약품의 개발에도 유리할 것으로 판단된다. 부수적으로 단일 효소공정이 지니는 장점으로 인해 전통적인 인디고 염료의 단점, 즉 고비용, 재현성 및 균일화 측면에서의 문제점도 극복할 수 있을 것으로 기대되어지며, 기존의 인돌 혹은 트립토판을 이용한 복잡한 생산과정을 대체할 수 있을 것이다. 글루코시다아제, 인디칸, 인디고